多效生长因子(pleiotrophin,PTN)是一种与Midkine(肝素结合细胞因子)同族的肝素结合因子。多效生长因子又名为HB-GAM、HBNF、OSF-1和NEGF1等。随着年龄的增长,PTN的表达位置也相应发生改变,从胚胎发育时期的神经及胚胎中胚层,到成年后表达局限在乳腺、心脏和睾丸等部位。国内外研究表明,PTN具有多种生物学功能,如促有丝分裂、促肿瘤生长、炎症发生、血管生成和骨发育等。尤其是在多种肿瘤疾病发生进展过程中,均检测到多效生长因子有一定程度的表达,典型的像乳腺癌、胃癌、肝癌和胰腺癌等。这表明PTN可以作为潜在的检测肿瘤进程的标志物,同时也可以作为肿瘤患者预后的标志。因此,制备多效生长因子抗体可以在实验科学及临床上得以应用,具有一定价值及意义。本论文首先构建pET-28a-his-PTN质粒,然后研究在大肠杆菌中利用IPTG诱导多效生长因子蛋白的表达条件。其中主要影响因素有诱导前生物量、氧通量、诱导温度、诱导剂浓度和诱导时间,并利用均匀设计试验成功找出其最优表达条件。镍钴亲和层析实验利用不同浓度咪唑缓冲液纯化出带有六个组氨酸(his)标签的蛋白,最终取得大量多效生长因子蛋白,并成功获得冻干粉。其次,在BALB/C小鼠免疫实验中,以纯化的多效生长因子蛋白作为抗原,并利用弗氏完全佐剂及弗氏不完全佐剂乳化PTN,分多次免疫小鼠。通过断尾取血,间接ELISA法检测小鼠血清中PTN多克隆抗体。取效价合格的小鼠脾脏,利用PEG 4000成功融合了小鼠脾细胞与NS-1骨髓瘤细胞。在HAT及HT选择培养基中通过两次筛选,获得表达稳定且抗体表达量高的杂交瘤细胞系。将杂交瘤细胞腹腔注射BALB/C小鼠制备小鼠腹水及收集杂交瘤细胞上清液的方法获得大量多效生长因子的单克隆抗体。最后,通过ELISA及Western blot鉴定单克隆抗体效价合格且具有一定的免疫原性。综上所述,本论文通过研究IPTG在大肠杆菌中诱导多效生长因子蛋白表达最优条件,利用镍钴亲和柱纯化获得大量PTN蛋白。通过小鼠免疫实验、杂交瘤细胞制备和制备腹水获得多效生长因子抗体。最终鉴定多效生长因子单克隆抗体可以特异性识别多效生长因子蛋白,可用于作为ELISA及Western blot的一抗选择,也可以作为有关PTN后续实验的研究基础。