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背景和目的:随着人类生活水平的日益提高,肥胖的发病率逐年升高,肥胖可以引起胰岛素抵抗、糖尿病、癌症、骨质疏松等,因此,对于肥胖我们需要积极预防和治疗。随着mi RNA的发现,越来越多的的研究证明mi RNA对脂肪细胞的分化具有一定影响。本研究以mi R-196b-5p为对象探讨其对脂肪细胞分化的作用,预测并鉴定其靶基因,初步探讨mi R-196b-5p影响脂肪细胞分化的机制。方法:1.对骨髓基质细胞系ST2进行脂肪细胞诱导分化,并利用RT-q PCR检测细胞分化过程中mi R-196b-5p的表达变化。对ST2细胞转染mi R-196b-5p mimics及mi R-196b-5p inhibitor并对细胞进行成脂诱导,利用RT-q PCR、Western Blotting和油红O染色等技术观察mi R-196b-5p对ST2细胞成脂分化的影响。2.利用靶基因预测软件对mi R-196b-5p的靶基因进行预测,构建表达靶基因3′UTR的荧光素酶报告基因载体,利用荧光素酶报告基因技术鉴定靶基因。探讨mi R-196b-5p调节脂肪细胞分化的分子机制。结果:1.mi R-196b-5p在ST2细胞诱导成脂后表达上升,提示mi R-196b-5p可能参与调控脂肪细胞分化。2.转染mi R-196b-5p mimics后,ST2细胞成脂特异性基因PPARγ、C/EBPα、a P2和adipsin的表达均上调,细胞分化成熟。而转染mi R-196b-5p inhibitor则与上述结果相反,表明mi R-196b-5p促进了脂肪细胞分化。3.生物信息学预测Tgfbr1、Nr2c2、Rbpj、Foxo1、Sema3a为mi R-196b-5p的潜在靶基因。双荧光素酶报告基因检测显示,mi R-196b-5p mimics与Tgfbr1、Foxo1 3′UTR荧光素酶报告基因质粒共转染AD293细胞后荧光素酶活性显著下降,但mi R-196b-5p mimics不能降低Nr2c2、Rbpj、Sema3a 3′UTR载体的荧光素酶活性。随后我们构建了Tgfbr1、Foxo1 3′UTR应答序列的缺失突变体,将此突变体或其野生型质粒与mi R-196b-5p mimics共转染后,双荧光素酶报告基因活性检测结果显示mi R-196b-5p mimics不能抑制突变体荧光素酶活性,证实Tgfbr1、Foxo1是mi R-196b-5p的靶基因。本研究证实mi R-196b-5p促进骨髓基质细胞的成脂分化,其作用机制可能是通过靶向结合Tgfbr1、Foxo1的3′UTR而阻断其翻译实现的。结论:1.mi R-196b-5p在小鼠脂肪细胞分化过程中显著上调。2.mi R-196b-5p促进骨髓基质细胞的成脂分化。3.Tgfbr1、Foxo1是mi R-196b-5p的靶基因,mi R-196b-5p可能通过靶向抑制Tgfbr1、Foxo1表达而促进脂肪细胞分化。