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本论文由二部分组成:(1)流感病毒神经氨酸酶DNA抗流感病毒保护性的序列解析;(2)神经氨酸酶酶活性关键序列分析。 神经氨酸酶(Neuraminidase, NA)是流感病毒表面主要糖蛋白之一。我们以前的研究表明NA-DNA在小鼠模型上诱导的免疫反应可以对同种病毒的攻击提供完全保护,并可对同亚型不同病毒株的攻击提供交叉保护。通过PCR的方法构建一系列从A/PR/8/34(H1N1)NA的5’端或3’端连续缺失的截短NA质粒,采用初次免疫后间隔三周以同样剂量加强免疫的方法将这些质粒免疫BALB/C小鼠。在加强免疫后一周,用致死量的病毒攻击小鼠。通过观察小鼠的存活率和检测血清中抗NA抗体的效价以及肺部病毒量来寻找NA抗流感病毒的关键序列。实验结果表明,随着NA DNA从5’端或3’端连续缺失的核苷酸数目增多,NA-DNA诱导的抗体效价下降。NA DNA从5’端连续缺失至60个核苷酸,或从3’端连续缺失至66个核苷酸,NA-DNA就失去保护作用。因而,NA DNA的nt58-nt1299片段在NA-DNA抗流感病毒中起重要作用。 NA具有酶活性。在流感病毒生活周期中,新合成的子代病毒血凝素(Hemagglutinin,HA)能够识别邻近病毒的N-乙酰神经氨酸残基并与之结合,使子代病毒自我聚集,无法释放。NA能够切断病毒表面的神经氨酸残基,抑制子代病毒的自我聚集,利于病毒释放。在小鼠模型上NA-DNA诱导产生的抗体能够抑制流感病毒NA的活性。用PCR方法构建一系列从A/PR/8/34(H1N1)NA的5’端或3’端连续缺失的截短NA质粒,用这些质粒免疫BALB/C小鼠,通过检测截短NA诱导产生的抗体对NA活性的抑制能力,来确定NA酶活性的关键区域。实验结果显示,NA的5’端330个核苷酸或3’端381个核苷酸在保持NA具有酶活性中起重要作用。