对虾WSSV RNAi技术建立及初步应用

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背景:对虾白斑综合征病毒WSSV(WhiteSpotSyndromeVirus)已成为养殖对虾的—主要病原,给对虾养殖业造成了巨大损失,弄清其侵染机理是有效防治的基础。本试验使用RNAi的方法对其几个重要蛋白的基因进行了研究,分析这几个基因被干涉掉后对WSSV侵染的影响。这几个基因分别是DNA聚合酶基因、核苷酸还原酶基因、胸苷激酶基因、胸苷酸激酶基因、衣壳蛋白VP24基因和囊膜蛋白VP28基因,RNAi是一种新的并极为有效的基因功能研究方法。方法:使用针对于每个蛋白基因的裸siRNA在凡纳对虾体内降低目的基因的表达。用半定量RT-PCR检测基因表达量。用对虾死亡状况和荧光定量PCR来鉴定各基因的沉默对WSSV侵染的影响。结果:试验数据表明siRNA在虾体内显著地降低了目的基因地表达量和WSSV的扩增速度,并且对延缓对虾的死亡也起到一定作用。结论:特异的siRNA有效地抑制了WSSV基因地表达。DNA聚合酶、核苷酸还原酶、胸苷酸激酶、衣壳蛋白VP24和囊膜蛋白VP28对WSSV的侵染是必不可少的,而胸苷激酶WSSV似乎可以使用宿主的胸苷激酶作为替代品。
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