目的检测Lgr5与肿瘤恶性程度以及肿瘤干细胞（Cancer Stem Cells,CSCs）干性是否存在相关性,建立人结直肠癌Lgr5⁺CSCs模型,探究炎症环境对CSCs增殖与凋亡的影响及其分子机制。方法1)通过Western blot检测人结直肠癌细胞系SW620、SW480、HT29、HCT116中Lgr5的表达,FACS分析SW620中Lgr5⁺细胞的比例;无血清悬浮培养获得SW620球细胞,FACS分选SW620^Lgr5+CSCs,通过集落形成实验以及5-FU耐药性实验研究其生物学行为。2)通过CCK-8实验确定TNF-α对SW620^Lgr5+CSCs作用的适宜剂量和时间,实验分为空白对照组（Control）、TNF-α组、MK2206组、TNF-α+MK2206组,分别通过集落形成实验与FACS法检测人结直肠癌SW620^Lgr5+CSCs的增殖和凋亡,通过Western blot检测PI3K/AKT通路相关蛋白AKT、p-AKT、GSK-3β、p-GSK-3β和凋亡蛋白Bax、Bcl-2的表达,研究TNF-α通过PI3K/AKT通路对SW620^Lgr5+CSCs增殖与凋亡的影响。结果1)Western blot结果表明SW620中Lgr5蛋白表达量高于其他几株细胞系,FACS结果显示SW620中Lgr5⁺细胞的比例为6.9%,经无血清悬浮培养所获得的SW620球细胞中Lgr5⁺细胞的比例显著上升至34.5%;通过FACS获得SW620^Lgr5+CSCs,其集落形成能力、5-FU耐药性明显高于人结直肠癌细胞SW620。2)SW620^Lgr5+CSCs经TNF-α处理发现,1 ng/mL TNF-α作用24 h对细胞增殖的促进效果最显著,因此后续实验在此条件下进行。TNF-α显著增强SW620^Lgr5+CSCs的集落形成能力,但对细胞凋亡无明显影响,MK2206可显著抑制细胞的增殖,促进细胞凋亡;TNF-α可活化PI3K/AKT通路,提高AKT、GSK-3β的磷酸化水平,MK2206可明显抑制TNF-α对细胞PI3K/AKT通路的活化,同时降低抑凋亡蛋白Bcl-2的表达,增加凋亡蛋白Bax的表达。结论1.以Lgr5作为CSCs标志物分选的SW620^Lgr5+CSCs具有更高的增殖能力与耐药性,提示Lgr5可作为CRC肿瘤干细胞标志物治疗靶点,具有潜在的临床应用价值。2.炎症因子通过活化PI3K/AKT通路促进CSCs的增殖;抑制该通路可抑制CSCs的增殖,促进其凋亡。提示:炎症环境对CSCs的存在具有重要作用,这为CRC的临床治疗提供了一定的理论依据。