【摘 要】
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目的:研究不同的自噬水平对前列腺基质细胞增殖、凋亡的影响;揭示5 α还原酶抑制剂（5-ARI）干扰雄激素受体（AR）信号通路对前列腺基质细胞自噬水平的影响;探索自噬相关基因ATG9对前列腺基质细胞自噬水平调控的分子机制。方法:1、收集前列腺增生症（BPH）和正常前列腺移行带组织标本,以及BPH患者的临床数据,通过免疫组化检测自噬相关基因（LC3和Beclin-1）、凋亡相关基因（cleaved c
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目的:研究不同的自噬水平对前列腺基质细胞增殖、凋亡的影响;揭示5 α还原酶抑制剂（5-ARI）干扰雄激素受体（AR）信号通路对前列腺基质细胞自噬水平的影响;探索自噬相关基因ATG9对前列腺基质细胞自噬水平调控的分子机制。方法:1、收集前列腺增生症（BPH）和正常前列腺移行带组织标本,以及BPH患者的临床数据,通过免疫组化检测自噬相关基因（LC3和Beclin-1）、凋亡相关基因（cleaved caspase-3和Bcl-2）表达水平,评估BPH组织自噬、凋亡水平与患者临床数据之间的关系。2、通过构建AR过表达慢病毒载体,稳定过表达前列腺基质细胞中AR,通过流式细胞学分析抑制AR信号通路前后前列腺基质细胞凋亡水平变化;通过Western blot、RFP-GFP-LC3腺病毒、透射电子显微镜检测AR信号通路对前列腺基质细胞自噬水平的影响;通过PCR芯片检测抑制AR信号通路前后自噬相关基因表达量的变化。3、通过shRNA慢病毒载体敲减前列腺基质细胞中ATG9A基因的表达水平,检测前列腺基质细胞自噬水平的变化;通过裸鼠前列腺肾包膜下成瘤实验验证前列腺基质细胞敲除ATG9A前后对前列腺上皮细胞和基质细胞增殖能力的影响,应用免疫荧光技术检测Ki67、LC3、ATG9在移植瘤中的表达情况。结果:1、BPH基质细胞LC3A/B表达相比前列腺正常组织显著升高,BPH基质细胞和上皮细胞均显著表达Beclin-1升高;5-ARI的治疗能够提高前列腺基质细胞自噬水平。2、1nM双氢睾酮（DHT）处理下的WPMY-1-AR细胞相比10nM DHT处理组表现出更高水平的基础自噬,利用雷帕霉素（RAPA）激活前列腺基质细胞的自噬能够抑制细胞的凋亡;PCR芯片检测发现干扰AR信号通路能够促进ATG9A的表达。3、我们利用shATG9A慢病毒成功构建了稳定敲减ATG9A表达的前列腺基质细胞;Western blot、RFP-GFP-LC3腺病毒、透射电子显微镜检测发现前列腺基质细胞ATG9A抑制后自噬水平明显下降;裸鼠肾包膜下成瘤实验显示敲减前列腺基质细胞ATG9A能够显著降低移植瘤体积,shATG9A组LC3散在分布于胞浆未能形成点状阳性信号,免疫荧光检测肾包膜下瘤组织增殖水平显示shATG9A相比ShNC组Ki-67阳性细胞比例降低明显。结论:1、BPH组织自噬水平明显高于正常前列腺组织,长期服用5α还原酶抑制剂能够进一步提高前列腺增生基质细胞的自噬水平,可能是导致前列腺增生症进展的机制之一。2、干扰前列腺基质细胞的AR信号通路能够提高细胞中的自噬水平,导致这一现象的原因与ATG9基因的上调有关。3、ATG9参与了前列腺基质细胞自噬水平的调控,抑制ATG9表达可以下调前列腺基质细胞自噬水平,抑制前列腺增生的进展。意义:本研究首次阐明了前列腺基质细胞中AR信号通路调控的自噬在前列腺增生进展过程中的重要作用,说明长期服用5α还原酶抑制剂能够上调前列腺基质细胞的自噬水平,这可能是BPH患者药物治疗后进展的重要原因之一。5 α还原酶抑制剂联合自噬抑制剂可以成为控制BPH进展的药物治疗方案之一。
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