胡蜂是一种重要的经济昆虫。蜂毒由蛋白质和非蛋白质两部分组成。非蛋白质成分含量较少,蛋白质成分中以毒素含量最高,是引起哺乳动物(包括人)、昆虫和甲壳类动物死亡和麻痹的主要活性物质,同时在过敏性、神经和心血管疾病治疗方面有十分重要的临床应用价值,因此具有重要的研究和开发意义。 国外对胡蜂毒素的基因研究多集中在主要过敏原-大分子量蛋白如磷脂酶A、透明质酸酶和酸性磷酸酶等方面。对于墨胸胡蜂毒腺内的物质还未见详细报道。Habermman认为,在胡蜂和马蜂毒腺中,并不存在与意蜂相同的溶血肽、蜂毒明肽、肥大细胞脱粒肽和镇静肽,浙江大学应用昆虫研究所的张素芳、施婉君等以意蜂毒腺基因为参照,通过RT-PCR的方法扩增出了墨胸胡蜂蜂毒前肥大细胞脱粒肽原基因、蜂毒明肽基因、前溶血肽原基因,并把它们与意蜂的基因作了比较,发现只有几个碱基的差异。这为研究此种胡蜂毒素提供了一种新的思路。 天然胡蜂肽是由其前体裂解而来。组分在不同组织中的顺序转运过程涉及到酶的加工作用。这个复杂变化与基因之间的关联机制还不清楚。胡蜂和蜜蜂属于膜翅目不同的总科,但毒液功能不尽相同。蜜蜂的毒液主要用于防御,而胡蜂的毒液用于防御和捕食,二者成份究竟有何差异也值得研究。胡蜂毒腺中含有多种毒素多肽,国内对这些基因的研究基本上还是空白。 墨胸胡蜂毒素成分复杂、含量甚微,且不易采集。对那些有用的组分研究、化学合成或生物合成是必然的。如果能够搞清楚它们的理化性质、作用机理,将为开发治疗疾病的新药和杀虫剂打下坚实的基础。为了深入研究墨胸胡蜂毒素的生物成份及其作用,本文以墨胸胡蜂毒腺为材料,构建了毒腺基因的cDNA文库。 用TRIZOL从墨胸胡蜂毒腺中提取总RNA,经Oligo(dT)磁珠纯化mRNA后,用AMV反转录酶合成第一链cDNA,然后在加入RNase H和E.coli DNA Polymerase