目的:维护肠-肝轴的功能是治疗肝脏疾病的重要辅助治疗方法。中医学、西医学都关注肠-肝轴在肝脏疾病发病及治疗中的地位,而胆汁酸循环和肠道毒素效应在维持肠-肝轴功能时发挥重要的作用。三味干姜散作为传统藏方,临床应用于肝脏疾病的治疗,实验研究也表明其对各种肝损伤模型均具有显著的保肝作用。随着研究的深入,我们发现三味干姜散在肝损伤大鼠模型中有着显著的保肝护肠的作用,而由于肠道和肝脏两者在生物学功能上密切联系,我们推测三味干姜散在维护肠肝轴功能中发挥着重要的作用。为验证这一假设,本研究在肝肠相关理论的基础上,观察三味干姜散对菌群失调小鼠肠-肝轴的调节作用,并从胆汁酸循环和肠道毒素效应的角度着手对具体机制进行了初步探究。方法:1.头孢曲松钠诱导的肠道菌群失调模型对小鼠肝肠的动态影响采用头孢曲松钠复制小鼠肠道菌群失调模型,分别于造模处理的第3d、6d、10d取小鼠盲肠内容物进行16S rDNA基因测定,HE染色观察回肠病理改变,透射电镜观察回肠紧密连接情况,免疫组化法检测回肠部分紧密连接蛋白ZO-1蛋白的表达,ELISA检测肠匀浆中炎症因子TNF-α、IL-1β的含量,同时检测肝脏ALT、AST和HE病理变化。2.三味干姜散对菌群失调小鼠肠肝轴功能的调节12g/kg头孢曲松钠复制小鼠肠道菌群失调模型,连续造模10天,期间三味干姜散连续治疗7天,第10天时无菌取小鼠盲肠内容物进行16S rDNA基因测定,取回肠相同部位1cm进行病理检查,透射电镜观察回肠紧密连接情况,免疫组化检测各组回肠部分紧密连接蛋白ZO-1、Occludin蛋白的表达,试剂盒检测血清中ALT、AST的含量变化同时对肝脏组织进行HE染色病理学检查。3.三味干姜散对菌群失调小鼠和IEC-6细胞中肠道毒素效应的抵抗①ELISA检测方法2.中各组小鼠肠匀浆中炎症因子TNF-α、IL-1β以及细菌病原模式分子的主要成分LPS的变化。②用细菌病原模式分子主要成分LPS（10μg/mL）或炎性因子TNF-α（25ng/mL）刺激肠上皮细胞IEC-6,同时用三味干姜散含药血清（5%、10%、20%）或其主要体内代谢成分6-姜酚（2、4、8μM）干预给药24h,MTT检测细胞活力,划痕实验检测细胞迁移能力,观察三味干姜散含药血清及其入血成分6-姜酚对IEC-6细胞的保护作用。4.三味干姜散对菌群失调小鼠胆汁酸循环的调节取方法2.中小鼠的肝脏,试剂盒检测肝匀浆中TBA、TC的含量变化;免疫组化检测肠道中FGF-15的表达;提取肝组织中的总蛋白检测胆汁酸合成相关蛋白FXR、CYP7A1;胆汁酸外排转运相关蛋白BSEP、MRP2;和胆汁酸重摄取相关蛋白NTCP等的表达。5.三味干姜散对菌群失调小鼠肝组织Nrf2/Bach1通路的影响取方法2.中小鼠的肝脏,提取肝组织中的核蛋白检测Nrf2/Bach1的表达,免疫荧光标记Nrf2和Bach1,激光共聚焦观察并半定量Nrf2和Bach1的入核情况。另外,提取肝组织中的总蛋白检测抗氧化酶HO-1和解毒酶NQO1蛋白的表达。结果:1.头孢曲松钠处理3d、6d、10d后,除Chryseobacterium（金黄杆菌属）、Pseudomonas（假单胞菌属）、Psychrobacter（嗜冷杆菌属）的相对丰度逐步上升外,Bacillus（芽孢杆菌属）、Lotus、Staphylococcus（葡萄球菌属）相对丰度逐步下降;肠道中ZO-1阳性表达和肠上皮细胞间的紧密连接随着处理时间的延长逐渐下降;TNF-α、IL-1β在菌群失调初期无明显变化,持续失调后显著性上升（P<0.01）。同时菌群持续失调会累及肝脏,表现为肝脏中ALT、AST显著上升（P<0.01）,肝细胞肿胀,肝索结构紊乱。2.与正常组相比,模型组小鼠肠道菌群失调,ZO-1和Occludin的阳性表达下降,回肠组织肠黏膜上皮水肿,间隙增大,肝脏功能受损;与模型组相比,三味干姜散改善了肠道菌群结构,增加了肠绒毛上皮细胞胞浆中ZO-1和Occludin的阳性表达,改善回肠和肝组织病理结构改变,降低了 ALT、AST表达（P<0.01）。3.①与正常组相比,模型组小鼠TNF-α、IL-1β、LPS显著上升（P<0.01或P<0.05）;与模型组相比,三味干姜散能显著性下调肠道中TNF-α、IL-1β、LPS的表达。②与正常组相比,LPS或TNF-α刺激下IEC-6细胞的细胞活性均显著下降（P<0.01）,细胞迁移能力显著性降低（P<0.01）;三味干姜散含药血清和6-姜酚均能显著提高IEC-6细胞的细胞活性（P<0.01）,同时细胞迁移能力显著提高（P<0.01）。4.与正常组相比,模型组中TBA、TC含量显著升高（P<0.01或P<0.05）,FGF-15的阳性表达降低,CYP7A1、FXR、BSEP、MRP2、NTCP的表达显著性降低（P<0.01）,而三味干姜散治疗后能显著下调TBA、TC的含量,FGF-15的阳性表达增多,显著上调 CYP7A1、FXR、BSEP、MRP2、NTCP 的表达（P<0.01）。5.与正常组相比,模型组Nrf2和Bach1的入核均有上升的趋势,Bach1的入核表达显著性上升（P<0.01）而Nrf2的入核表达上升不具有统计学意义,导致Nrf2和Bach1的比值显著性下降（P<0.01）,HO-1的表达中显著下调（P<0.01）,NQO1的表达也下降。与模型组相比,三味干姜散治疗后Nrf2、HO-1和NQO1的表达显著上升（P<0.01）,Bach1的表达显著性下降（P<0.01）,核内Nrf2和Bach1的比值显著上升（P<0.01）结论:1.随着肠道菌群失调的持续发生,肠道稳态被破坏,肠黏膜上皮屏障的破坏加重,肠道中炎症因子的表达逐渐上升,同时肝脏功能受到影响。2.三味干姜散能显著改善菌群失调小鼠肠肝轴功能的损伤。3.体内实验显示,三味干姜散能够降低菌群失调小鼠体内的肠道毒素效应。体外实验也提示三味干姜散可以减轻细菌病原模式分子的主要成分LPS和炎症因子TNF-α引起的肠道毒素效应,表现在减轻肠道炎症和促进肠道黏膜修复等方面,但对胆汁酸循环的体外研究目前还在进行中。4.三味干姜散对胆汁酸循环有一定的调控作用,能显著增加胆汁酸合成相关蛋白（FXR,CYP7A1）,胆汁酸外排相关蛋白（BSEP,MRP2）和胆汁酸重摄取相关蛋白（NTCP）的表达,上调FGF-15的表达,降低肝脏内胆汁淤积。同时能显著上调Nrf2/Bach1的比值,及其下游相关蛋白的表达,这可能是三味干姜散抵抗肠道毒素效应调节胆汁酸循环达到维持肠-肝轴功能的作用机制。