基于内质网途径研究雄黄诱导急性髓系白血病THP-1细胞凋亡的机制及临床观察

来源 :山东中医药大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:lan2009908
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目的:本研究旨在探讨雄黄通过内质网途径诱导急性髓系白血病(acute myelogenous leukemia,AML)细胞株THP-1凋亡的潜在机制,为雄黄靶向用于AML的治疗寻求实验学支持;评价老年AML患者使用含雄黄方剂治疗的有效性及安全性,以期为提高老年AML的临床疗效提供新的思路和方法。方法:1、体外实验:(1)培养AML细胞株THP-1;(2)CCK-8法检测不同浓度、不同作用时间雄黄溶液对THP-1细胞体外生长的抑制率,确定雄黄溶液的IC50值;(3)RT-PCR法检测对照组及雄黄组PERK,e IF-2α,CHOP m RNA表达水平;(4)Western-blot法检测对照组及雄黄组PERK、e IF-2α、p-e IF-2α、CHOP蛋白表达水平。2、临床试验:选择2016年6月至2019年3月就诊于山东省中医院血液科的老年AML患者21例,年龄≥60岁,随机分为对照组和中药组,对照组11例,中药组10例。对照组给予常规化疗方案,中药组在常规化疗基础上,配合服用升麻鳖甲汤,一日2次,共服10d。一个疗程后,分析对比两组患者中医症候积分、缓解率及不良反应。结果:1、体外实验:(1)CCK-8法显示雄黄对THP-1细胞具有抑制增殖作用,呈浓度、时间依赖性。雄黄作用于THP-1细胞24h的IC50值为0.06 mg/ml,分别用0.05mg/ml、0.1 mg/ml、0.15 mg/ml雄黄溶液处理细胞,24小时后行其他实验;(3)RT-PCR结果表明,PERK,e IF-2α,CHOP表达增多,且与浓度呈正相关,结果具有统计学意义(P<0.05);(4)Western-blot结果表明,雄黄组与对照组相比,PERK表达增多,e IF-2α水平无明显变化,但e IF-2α磷酸化水平增高,CHOP表达增多,与浓度呈正相关,结果具有统计学意义(P<0.05)。2、临床试验:在中医证候积分方面,雄黄组患者在治疗前中医症候总积分为(6.60±3.01),与对照组(6.53±3.16)相比无明显统计学差异(p>0.05);经治疗后,对照组患者中医症候积分为(2.80±1.33),与治疗前相比差异有统计学意义(p<0.01);而雄黄组患者积分为(1.73±1.06),与治疗前相比差异有统计学意义(p<0.01);与治疗后的对照组相比,雄黄组患者积分明显降低,二者有统计学差异(p<0.05)。对照组ORR为45%,CR为27%,中药ORR为60%,CR为40%,均高于对照组,但统计学上无明显差异(P>0.05)。中药组各不良反应的发生率均低于对照组,但无统计学差异(P>0.05)。结论:雄黄溶液能够抑制THP-1细胞增殖并诱导其凋亡,这种抗肿瘤作用可能通过内质网应激途径实现的,为临床应用雄黄治疗AML提供实验支持。含雄黄方剂升麻鳖甲汤能够在一定程度上提高老年AML患者的疗效,减少不良反应,改善中医证候。
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