论文部分内容阅读
目的：我们先前的研究证实了Girdin蛋白在肝癌中高表达,本研究旨在探索在肝癌中Girdin高表达的原因,并证明miR-101确实能通过靶向调控Girdin的表达而发挥抑制肝癌细胞增殖及侵袭转移的作用。方法：(1)采用qRT-PCR法分别检测肝癌及癌旁组织Girdin mRNA的表达水平；(2)通过Targetscan、miRanda预测调控Girdin表达的miRNA;(3) qRT-PCR法分别检验肝癌及癌旁组织miR-101的表达水平；(4)使用qRT-PCR、Western blot法分别检测转染miR-101对HEPG2细胞Girdin mRNA及蛋白表达水平的影响；(5)先行构建Girdin-3’UTR质粒,再将质粒及miR-101mimics转染至HEPG2细胞；行双荧光素酶检测验证Girdin是否为miR-101的直接靶基因；(6)使用CCK法测验miR-101对HEPG2细胞增殖能力的影响；(7)运用细胞划痕法检测miR-101对HEPG2细胞迁移能力的影响；(8)应用Transwell实验检验miR-101对HepG2细胞侵袭能力的影响。结果：(1)Girdin mRNA在肝癌组织的表达高于癌旁组织；(2)Targetscan、miRanda软件示Girdin-3’UTR有miR-101的结合区域；(3)miR-101在肝癌组织的表达低于癌旁组织；(4)转染miR-101后的HEPG2细胞Girdin mRNA及蛋白表达水平下调；(5)双荧光素酶实验示转染miR-101能抑制Girdin-3’UTR荧光素酶活性；(6)转染miR-101后HEPG2细胞的增殖能力减弱；(7)转染miR-101后HEPG2细胞的迁移能力减弱；(8)转染miR-101后HEPG2细胞的侵袭能力减弱。结论：(1)Girdin在肝癌中高表达,其部分原因为直接调控其表达的miR-101在肝癌中低表达；(2)肝癌中miR-101可能通过直接靶向调控Girdin来抑制肝癌细胞的增殖和侵袭转移。图26幅,表9个,参考文献58篇