气肿疽是一种急性、败血性人兽共患传染病,发病率和死亡率极高。当前,对该病的诊断主要有病原学检查、间接ELISA法和PCR检测,但这些方法操作复杂,需用较多试剂及专门的仪器设备,不适合于现场的快速检测。本研究旨在建立快速、准确而简便的检测气肿疽的胶体金免疫层析试纸条。本试验制备气肿疽梭菌(Clostridium chauvoei)单克隆抗体,以全菌免疫BALB/c小鼠,融合后对杂交瘤细胞进行检测筛选,再经多次亚克隆最终获得一株能稳定分泌气肿疽梭菌单克隆抗体的杂交瘤细胞株,命名为1E4B6,经鉴定,其亚型为IgG1,轻链为K链；该单克隆抗体与腐败梭菌、产气荚膜梭菌、肉毒梭菌等无交叉反应,可特异性识别气肿疽梭菌。腹水效价为1：51200。对于该单克隆抗体的纯化,采用Protein A亲和层析经硫酸铵法粗提单抗的方法。免疫胶体金的制备为试验的重点。制备了20nm粒径的胶体金颗粒,确定了胶体金与该单抗的最佳结合量为30μ g/mL,最佳pH值为8.4,最佳NC膜为Millipore HFB1350220型。将纯化的气肿疽梭菌多抗及羊抗鼠IgG分别以1：4和1：8的稀释倍数喷于硝酸纤维素膜的T线和C线。对胶体金诊断试纸条进行验证,敏感度高,可检测到的最低抗原量为1*105CFU/mL；特异性强,无假阳性与交叉反应现象；有较好的稳定性。气肿疽胶体金免疫层析试纸条以免疫层析法为指导,根据抗原-抗体的特性,建立了此种不需要再加入任何检测试剂的快速简便的检测方法,而且保质期长可常温放置5个月,该试纸条的推广应用将为广大基层单位和野外作业人员进行及时或大批量时间紧迫的检测或进行大面积普查提供极大便利。