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牛轮状病毒（Bovine Rotavirus,BRV）属于呼肠孤病毒科（Reoviridae）轮状病毒属（Rotavirus）,为双股RNA病毒,共分11个节段,是引起犊牛病毒性腹泻的主要病原之一。该病多发生于1月龄以内的犊牛。犊牛感染后表现为精神沉郁、食欲废绝、水样腹泻、严重脱水、酸中毒,甚至死亡。2008年11月至2009年4月,在大庆某牧场共收集140份新生牛腹泻样品,经A群轮状病毒抗原检测试剂盒确定为阳性的样品,处理后接种于MA104细胞,盲传数代后分离到一株牛轮状病毒。该分离毒于第九代出现明显的细胞病变。随着传代次数的增加,该分离毒出现细胞病变的时间提前,细胞病变程度亦随之加剧。病毒在MA104细胞上传至第11代时测得TCID50为10-7.6/0.1mL。该病毒对5-碘脱氧尿核苷、酸、氯仿、乙醚均不敏感,不耐热,50℃加热60min可被完全灭活,Mg2+对该病毒不具有保护作用;该病毒能被BRV参考株阳性血清中和;应用特异性引物,通过RT-PCR检测方法从病毒细胞培养物中扩增出BRV VP7基因中1 062bp的特异性片段,此片段与GenBankTM中BRV毒株G10型VP7基因相应片段的核苷酸序列同源性为95. 4%、95.5%。以上结果表明所分离到的病毒为牛轮状病毒,命名为BRV DQ株。利用差速离心法纯化的牛轮状病毒（BRV）分别免疫鼠和兔,制备了鼠抗BRV和兔抗BRV超免疫血清,并用层析方法进行了纯化,建立了检测BRV的双抗体夹心ELISA方法。该双抗体夹心ELISA的最佳反应条件为:兔抗BRV IgG包被浓度为10μg/mL,鼠抗BRV IgG工作浓度为5μg/mL,样品反应时间60 min,酶标抗体工作浓度为1: 5 000,以OD450nm≥0.432作为阳性判定标准。该方法的板间、板内重复性变异系数小于10%,最低检测浓度为1.41μg/mL,并与牛呼吸道合胞体病毒（BRSV）、牛冠状病毒（BCV）和牛传染性鼻气管炎病毒（IBRV）以及空肠弯曲杆菌（Campylobacter jejuni, Cj）、产肠毒素性大肠杆菌（Enterotoxigenic E.coli,ETEC）等病原无交叉反应。用建立的ELISA方法与BRV RT-PCR方法同时检测40份临床粪便样品,符合率达到95%。结果表明,建立的双抗体夹心ELISA方法具有较好的特异性和较高的敏感性,可用于BRV的快速检测。本研究利用MA104细胞成功分离牛轮状病毒,并建立了双抗体夹心ELISA诊断方法,为牛轮状病毒诊断试剂盒的研制和深入开展病原学研究奠定了基础。