AAV-hTGF βI体外转染鼠椎间盘细胞再移植的实验研究

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目的:将腺相关病毒(AAV)介导人转化生长因子β1(hTGFβ1)基因体外转染大鼠椎间盘细胞后再移植至大鼠的椎间盘中,观察其对椎间高度、Ⅱ型胶原和蛋白多糖的影响。方法:Wistar大鼠40只,以L6/S1椎间盘作为空白对照组,不进行处理;L5/L6椎间盘作为针刺组,暴露以后用显微注射器从椎间盘的前外侧向椎间盘内注射磷酸盐缓冲液;L4/L5椎间盘作为实验组,手术n0暴露后用显微注射器从椎间盘的前外侧向椎间盘内注射AAV-hTGFβ1体外转染后的椎间盘细胞悬液。术前对所有大鼠腰椎间盘进行X线检查,分别于术后4周,8周各取20只大鼠进行腰椎间盘X线检查,并随即处死利用反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)对腰椎间盘组织中的Ⅱ型胶原和蛋白多糖的基因表达进行半定量分析。结果:术后4周,针刺组手术前后椎间盘高度指数的变化(%DHI)均低于实验组和空白对照组,差异有显著性(F=321.22,q=30.44、32.56,P<0.05);实验组手术前后%DHI略低于空白对照组,差异无显著性(p>0.05)。针刺组Ⅱ型胶原和蛋白多糖表达明显低于实验组和空白对照组,差异有统计学意义(F=55.05、34.79,q=8.96-12.43,P<0.05);实验组Ⅱ型胶原和蛋白多糖表达略低于空白对照组,差异无统计学意义(P>0.05)。术后8周,针刺组手术前后椎间盘高度指数的变化(%DHI)均低于实验组和空白对照组,差异有显著性(F=376.28,q=22.93、24.49,P<0.05);实验组手术前后%DHI略低于空白对照组,差异无显著性(p>0.05)。针刺组Ⅱ型胶原和蛋白多糖表达明显低于实验组和空白对照组,差异有统计学意义(F=53.42、32.56,q=6.49-11.37,P<0.05);实验组Ⅱ型胶原和蛋白多糖表达略低于空白对照组,差异无统计学意义(P>0.05)结论1.腺相关病毒体外转染转染大鼠的椎间盘细胞具有较高的的转染效率并能实现较强的基因表达。2.再次证实了在以大鼠为实验动物的情况下,椎间盘细胞移植是可行的。3. AAV-hTGFβ1基因体外转染大鼠椎间盘细胞后再移植至大鼠的椎间盘中,空白对照组和实验组多聚蛋白多糖和Ⅱ型胶原的表达量在术后4周,8周都明显高于针刺组,表明其可以提高椎间盘多聚蛋白多糖和Ⅱ型胶原的表达。4. AAV-hTGFβ1基因体外转染大鼠椎间盘细胞后再移植至大鼠的椎间盘中,空白对照组和实验组的术前与术后4周%DHI,以及术前与术后8周%DH工都明显要高于针刺组,表明其有助于椎间盘高度的维持。
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