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结直肠癌是一种常见的严重危害人类生命健康的消化道恶性肿瘤,目前为止常见的治疗手段如手术切除或结合放疗、化疗等的综合治疗方法仍未取得令人满意的效果。因此早期发现,早期诊断,早期治疗并制定个性化的治疗方案是提高治愈率的最佳手段。胸腺基质淋巴细胞生成素(Thymic stromal lymphopoietin,TSLP)既往研究认为与变态反应性疾病如哮喘、炎症性肠病等发病相关,发病机制为其诱导的下游Th2型免疫反应。慢性炎症一直认为与肿瘤的发生相关,有文献报道TSLP可以通过诱导Th2细胞参与的慢性炎症导致恶性肿瘤如乳腺癌、胰腺癌的发生,但也有文献报道TSLP虽可促进皮炎发生却能抑制皮肤肿瘤的发生。而且,TSLP对于肿瘤细胞的直接作用至今未见报道。因此,关于TSLP在各种恶性肿瘤中的作用及其具体机制可能存在其多样性且仍待商榷。结肠癌的发生是上皮细胞的慢性恶变过程,TSLP可由肠上皮细胞分泌,正常情况下可维持肠腔内微环境的稳定,但其在结肠肿瘤发生中的作用至今未有研究报道。目的：为了明确TSLP在人结直肠癌组织中的表达情况,以及TSLP对结直肠癌细胞的直接作用,对结直肠肿瘤生长的调控机制,本课题分为四部分：(1)探讨TSLP在人结直肠肿瘤组织及瘤旁组织中的表达水平,及其与肿瘤分期的关联性；(2)选取swl116、sw480及DLD-1三株结直肠癌细胞系,探讨活性的TSLP受体(TSLPR)复合物在结直肠癌细胞表面的表达；(3)探讨TSLP结合TSLPR后对结直肠癌细胞的增殖、凋亡及细胞周期的调节作用效应；(4)探讨TSLP-TSLPR活化后在结直肠癌细胞中的下游信号传导通路、促凋亡机制及凋亡信号通路;(5)探讨外源性TSLP对人结直肠癌裸鼠移植瘤模型中肿瘤生长的调控作用方法：(1)收集40例结直肠癌患者的手术切除标本,并依据临床资料进行肿瘤的Duke’ s分期。Realtime-PCR法、ELISA法、免疫组化法检测肿瘤组织及瘤旁组织中TSLP的mRNA和蛋白表达水平及表达部位,并判断其与Duks’ s分期的关联；(2)RT-PCR、免疫细胞化学法及流式细胞法检测结直肠癌细胞株sw1116、sw480及DLD-1表面活性TSLP受体(TSLPR)复合物的表达；(3)不同浓度外源性TSLP刺激结直肠癌细胞株48h后,Annexin-V-PI法检测细胞凋亡率的改变,PI法测定细胞周期变化,CCK-8检测细胞增殖率变化,western-blot检测凋亡执行关键蛋白caspase3、PARP的表达变化；(4)不同浓度外源性TSLP刺激结直肠癌细胞株48h后,western-blot法检测MAPK通路相关蛋白p-JNK、p-P38及其转录因子STAT3、P53、P21,内/外源性凋亡信号通路蛋白caspase8、caspase9及线粒体凋亡调控分子bid、bax、bim、bad、bak的表达。TSLP干预同时予加入caspase8抑制剂后,Annexin-V-PI检测细胞凋亡率及western-blot检测下游caspase3的表达变化。JC-1法检测凋亡早期线粒体膜电位的改变；(5)选取雌性裸鼠分为control对照组和TSLP干预组,皮下注射sw1116细胞制造人结直肠癌裸鼠移植瘤模型,分别予PBS及5ug/kg外源性TSLP瘤旁注射干预,检测肿瘤大小及重量差异,HE染色评估肿瘤坏死及白细胞浸润,TUNEL法测定肿瘤细胞的凋亡,western-blot测定肿瘤cleaved-caspase3表达结果：(1)入结直肠肿瘤组织中表达TSLP,可由肿瘤细胞或间质细胞分泌,而瘤旁组织表达TSLP的部位在肠粘膜上皮细胞,前者TSLP的mRNA和蛋白表达水平均低于后者(p<0.05)。肿瘤组织中TSLP的表达水平与Duke’s分期呈负相关(p<0.05),A期表达量最多而D期表达量最少；(2)结直肠癌细胞株swlll6、sw480及DLD-1表面均有活性的TSLP受体(TSLPR)复合物的表达；(3)不同浓度外源性TSLP刺激三株结直肠癌细胞48h后,首先细胞总凋亡率均有明显的上升,且执行凋亡关键蛋白cleaved-caspase3和cleaved-PARP的表达水平亦明显升高,该促凋亡效应与TSLP浓度呈现剂量依赖性(p<0.05)；其次,sw1116、sw480细胞株的增殖率有明显下降,该效应亦与TSLP浓度呈现剂量依赖性(p<0.05),而DLD-1的抑制增殖效应不明显；最后,细胞周期中G1期及S期比例的变化均不明显,而G2/M期比例有所下降,效应与TSLP浓度呈现剂量依赖性(p<0.05),以200ng/ml TSLP干预效应最明显；(4)不同浓度外源性TSLP刺激三株结直肠癌细胞48h后,磷酸化的JNK和P38及P53、P21的表达水平随着TSLP干预剂量的增加而逐渐增高,而磷酸化的STAT3的表达水平则随着TSLP干预剂量的增加而逐渐降低：同时,cleaved-caspase8 和 cleaved-caspase9的表达水平升高,而在TSLP处理同时加入caspase8抑制剂后,细胞凋亡率增加效应及cleaved-caspase3表达增加效应被抑制；线粒体膜凋亡调控蛋白bim、bid、bak、bad及bax的表达水平增高且与TSLP浓度呈正相关性；线粒体膜电位亦随着TSLP浓度增加而逐渐降低,JC-1单体比例逐渐增加；(5)人结直肠癌裸鼠皮下移植瘤在外源性TSLP处理后,肿瘤的体积及重量均比对照组明显下降,肿瘤内部坏死程度、白细胞浸润程度、细胞凋亡数量及cleaved-caspase3的表达水平均较对照组明显增加(p<0.05)。结论：人结直肠肿瘤组织中表达的TSLP可能具有抑癌作用,且与肿瘤严重度有一定相关性,可作为判断肿瘤预后的有价值指标。结直肠癌细胞表面表达活性TSLPR,外源性TSLP可通过结合它来激活胞内MAPK通路及外源性凋亡通路相关分子来促进细胞凋亡,该促凋亡效应具有剂量依赖性,线粒体依赖凋亡途径亦参与该凋亡机制。TSLP能有效抑制人结直肠癌裸鼠移植瘤的增长,具备一定的临床应用前景和可行性。