【摘 要】
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目的慢性牙周炎主要通过机械方式治疗如龈下刮治,此外,也常用药物辅助牙周炎治疗。但是药物治疗主要依靠抗生素,会引起口腔菌群失调和耐药性等问题。补骨脂素是补骨脂的有效成分,具有抗炎、抗菌、免疫调节和成骨活性,被广泛应用在治疗骨质疏松症中,在肠-肝循环中表现出快速吸收。那补骨脂素对肠道有怎样的影响,是否通过调节肠道功能影响全身免疫,从而影响骨-包括牙槽骨代谢。基于以上背景,本实验通过构建大鼠牙周炎模型,
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目的慢性牙周炎主要通过机械方式治疗如龈下刮治,此外,也常用药物辅助牙周炎治疗。但是药物治疗主要依靠抗生素,会引起口腔菌群失调和耐药性等问题。补骨脂素是补骨脂的有效成分,具有抗炎、抗菌、免疫调节和成骨活性,被广泛应用在治疗骨质疏松症中,在肠-肝循环中表现出快速吸收。那补骨脂素对肠道有怎样的影响,是否通过调节肠道功能影响全身免疫,从而影响骨-包括牙槽骨代谢。基于以上背景,本实验通过构建大鼠牙周炎模型,研究补骨脂素对慢性牙周炎大鼠牙槽骨吸收的影响,及其通过肠道吸收时对肠道屏障的影响,探讨补骨脂素作用于慢性牙周炎可能的作用机制,为补骨脂素防治慢性牙周炎奠定理论基础。方法52只无特定病原体（specific pathogen free,SPF）SD大鼠,雄性,8周龄。随机分为4个组:设对照组,单纯给药组,模型组,牙周炎大鼠给药组,每组为13只。其中模型组及牙周炎大鼠给药组大鼠,结扎丝结扎双侧上颌第二磨牙,建立牙周炎模型,建模成功后拆除结扎丝,并同时对单纯给药组及牙周炎大鼠给药组灌胃8mg/Kg/2d补骨脂素溶液,对照组和模型组大鼠,以相同频次灌生理盐水,4w后取样。取血分离血清,ELISA检测各炎症因子的表达水平;处死大鼠,分离双侧上颌样本,通过HE染色观察组织改变、Micro-CT扫描并三维重建后测量牙槽骨吸收值、免疫荧光染色法检测上颌第二磨牙牙槽骨中成骨和破骨蛋白表达水平;分离回肠组织及新鲜的肠内容物,用于免疫组织化学染色法检测回肠黏膜NOD2蛋白表达水平、ELISA法检测回肠黏膜Occludin、Claudin-5蛋白表达水平以及提取肠内容物DNA后通过Illumina Miseq平台进行16S r RNA基因高通量测序。结果（1）牙周组织检测结果:HE染色及Micro-CT三维重建显示牙周炎建模大鼠上颌第二磨牙附着丧失,形成牙周袋,牙槽骨吸收,建模成功。对上颌骨Micro-CT三维重建后进行骨计量分析发现模型组牙槽骨丢失值（P＜0.01）和骨小梁分离度Tb.Sp（P＜0.05）均明显高于于牙周炎大鼠给药组,同时骨体积分数BV/TV显著低于牙周炎大鼠给药组（P＜0.05）,说明补骨脂素能减轻牙周炎引起的牙槽骨吸收。免疫荧光染色显示补骨脂素可以降低牙周炎大鼠RANKL/OPG比值。（2）回肠及其内容物检测结果:回肠黏膜机械屏障中Claudin-5蛋白、Occludin蛋白组间均没有显著差异。模型组（P＜0.01）和牙周炎大鼠给药组（P＜0.05）回肠黏膜免疫屏障NOD2蛋白累积光密度（integrated optical density,IOD）值均高于对照组,但相较于模型组,牙周炎大鼠给药组IOD值明显降低（P＜0.05）。肠道菌群Alpha多样性分析显示单纯给药组Chao1指数显著高于对照组（P＜0.05）,牙周炎大鼠给药组Shannon指数显著高于模型组（P＜0.05）。进一步线性判别分析（linear discriminant analysis effect size,LEf Se）发现单纯给药组组梭菌目、梭菌纲相对含量升高。模型组和单纯给药组的F/B比均低于对照组（P＜0.001）,牙周炎大鼠给药组的F/B比低于模型组（P＜0.05）。（3）血清检测结果:促炎因子IL-6组间没有显著差异。模型组促炎因子TNF-α表达水平高于牙周炎大鼠给药组（P＜0.05）和对照组（P＜0.01）。且模型组抗炎因子IL-10表达水平显著低于牙周炎大鼠给药组（P＜0.01）。结论（1）补骨脂素可降低牙周炎大鼠的牙槽骨吸收。（2）本研究证明补骨脂素具有调控牙周炎大鼠肠道免疫屏障和生态屏障的功能。（3）补骨脂素可促进抗炎因子IL-10的分泌,减少促炎因子TNF-α的分泌,抑制RANKL的表达。（4）通过以上研究我们认为,补骨脂素是否通过调控肠道屏障而影响炎症因子水平,继而减少牙槽骨吸收,值得进一步深入研究。
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