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目的：端粒是人类染色体末端结构，在维持基因组稳定性中发挥重要作用。最近研究发现，端粒酶活性和端粒长度在肿瘤细胞亲本细胞系和耐药细胞系中存在明显差异。双微体是肿瘤细胞中染色体外的无着丝粒、双点样的染色体成分，是癌基因和耐药基因的载体，与肿瘤细胞发展和耐药密切相关。本研究以人结肠癌HT-29细胞及其耐药细胞作为研究对象，探讨端粒酶与MTX耐药的相关性，并对端粒酶活性与耐药细胞中双微体结构形成关系进行初步探讨。方法应用RNAi技术干扰端粒酶的活性单位-hTERT的表达。MTT法对干扰前后HT-29/MTX10-5 mol/L耐药细胞对MTX的敏感性进行分析。端粒酶抑制剂叠氮胸苷(Azidothymidine，AZT)连续作用下培养耐药细胞四周，每周收取细胞DNA、RNA以及细胞的中期染色体标本。应用Realtime PCR检测不同MTX耐药浓度细胞系的端粒长度和端粒酶活性，以及DHFR的基因的扩增和表达情况。吉姆萨染色法核型分析染色体的结构改变：并应用FISH技术检测细胞染色体端粒的状态。结果与HT-29亲本细胞相比，HT-29/MTX10-5 mol/L中hTERT mRNA明显上调(≈7.3倍)。siRNA hTERT干扰端粒酶催化亚基后，细胞的端粒酶活性下调约50％；而端粒长度没有明显改变；细胞对Mrx的敏感性上调了约8.08倍；DHFR基因扩增和表达水平没有变化。AZT作用后引起HT-29/MTX10-5 mol/L端粒酶活性的明显下调；DHFR基因扩增和表达呈波动性变化；端粒长度出现明显变化；端粒缺失增加，引起基因组的不稳定，主要表现为染色体的断裂、双着丝粒染色体的增多、细胞融合引起的多倍体及小染色体结构的出现，而且出现的双点样的小染色体结构上存在端粒信号。结论端粒酶通过维持基因组的稳定性参与维持HT-29细胞对MTX的耐受，且这种作用不是通过改变DHFR基因扩增实现的。