UPLC-Q-TOF检测云南省常见毒蘑菇中毒蝇碱、鹅膏蕈氨酸、蝇蕈醇、脱磷酸裸盖菇素方法建立及含量分析

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[目 的]建立UPLC-Q-TOF对野生毒蘑菇中毒蝇碱、鹅膏蕈氨酸、蝇蕈醇、脱磷酸裸盖菇素的分析方法。有利于对食用野生菌引起的突发食物中毒事件中中毒成分的快速筛查,定性定量检测为临床医师救治中毒患者提供科学依据。[方法]野生毒蘑菇样品加甲醇涡旋混匀,超声、离心提取、残渣中再加入甲醇,旋涡混匀,超声、离心提取,合并上清液。旋转蒸发至近干后,用2mmol/L乙酸铵甲醇/水(20:80,v/v)溶解定容。目标化合物用ACQUITY UPLC BEH Amide(100 mm×2.1 mm,1.7 μm)色谱柱分离后,用含0.5%甲酸+5 mmoL/L 乙酸铵水溶液/乙腈流动相梯度洗脱。运用Q/TOF在ESI正离子模式下采集数据,并对野生菌中的毒蝇碱、鹅膏蕈氨酸、蝇蕈醇、脱磷酸裸盖菇素进行定性定量分析。[结 果]确定了液相色谱分离条件和质谱条件。建立了野生菌中4种毒素的一级和二级特征谱库;建立了超高效液相色谱-飞行时间质谱(UPLC-Q-TOF)定性定量检测云南省常见毒蘑菇中毒蝇碱、鹅膏蕈氨酸、蝇蕈醇、脱磷酸裸盖菇素的方法。对云南省常见野生毒蘑菇进行检测并确定了含有这四种毒素的毒蘑菇品种。该方法对检测4种毒素的线性范围,检出限,定量限,平均回收率和标准差结果如表1。该方法检测4种目标化合物在相应的范围内具有良好的线性关系,运用上述方法对云南省六个地州及自行采集的常见野生毒蘑菇进行了定性定量检测,通过对检测结果的分析发现有22种野生菌含一种或几种目标化合物。[结 论]UPLC-Q-TOF用于定性定量检测野生毒蘑菇中毒蝇碱、鹅膏蕈氨酸、蝇蕈醇、脱磷酸裸盖菇素的方法,通过目标化合物的特征普库,应用精确分子量及一级和二级质谱在定性时能够对多种化合物进行双重定性,确保定性的准确性。在定量测定时,经过标准品建立的标准曲线对目标化合物定量。该方法具有简便高效、灵敏度高、特异性好、准确性好的特点,通过实际样品的检测运用证明,具有实际应用价值,填补了这类神经精神型毒素检测的空白,为临床医师救治野生菌中毒者提供科学依据。同时,为食品安全风险监测提供更为便捷可靠的检测途径,经过该方法筛查确定了部分云南省含有这4种毒素的毒蘑菇品种,也为采摘及食用野生毒蘑菇人群提供参考和警示。
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