赭曲霉毒素A(OA)是曲霉菌属和青霉菌属的某些产毒菌株的次级代谢产物,对农作物的污染在全球范围内都比较严重,是一种强烈的肾毒素和肝毒素,还具有免疫抑制性,并有致畸、致癌和致突变的作用。目前OA的检测技术主要有仪器法和免疫分析技术。仪器法主要有薄层色谱法,高效液相色谱法以及质谱联合法等,这些方法样品处理繁琐费时,成本高,而且需要有经过专门训练的专业人员来操作复杂的仪器设备,不适合大批量样品的测定。免疫分析技术主要是酶联免疫吸附测定(ELISA),作为一种快速、灵敏、特异的检测方法,正逐渐应用于毒素的残留检测。本研究通过抗原的合成和抗赭曲霉毒素A单克隆抗体的研制,建立了OA的ELISA检测方法。利用试剂盒偶联的OA-BSA为免疫原免疫6周龄BALB/c小鼠,采其脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞融合,用间接ELISA以及间接竞争ELISA筛选,经五次亚克隆得到了稳定分泌抗OA单克隆抗体的杂交瘤细胞株D6。特异性试验证明D6株单抗有较强的特异性。依照活性酯法将OA与OVA偶联作为包被抗原,建立了间接竞争ELISA检测OA的方法。实验结果表明:竞争ELISA最佳包被抗原浓度为1.5μg/孔,抗OA-McAb最佳工作浓度为1:500,酶标二抗的工作浓度为1:10000,可测最适范围为1~100ng/mL,最小检测量为1ng/mL,OA对该单抗的半数抑制浓度为10ng/mL。批内和批间误差分别为1.6%和6.08%。