目的： 建立一种目标蛋白高得率的中试发酵工艺和高效分离纯化工艺，以便获得较大量具有生物学活性的rhNDPK-α。 方法： 利用抗性鉴定、质粒抽提后双酶切鉴定、以及表达鉴定来研究重组工程菌继代培养50次后菌的遗传稳定性；通过研究培养基中不同成分对菌生长及表达的影响效果，来确定培养基中各成分的浓度，在摇瓶实验的基础上确定发酵工艺；发酵后所获菌体经破碎离心后的上清液经不同的纯化流程，比较分离纯化效果；利用高压液相层析(HPLC)快速检测不同反应体系中酶比活性；将纯化后的rhNDPK-α与顺铂联有，研究其对顺铂杀伤癌细胞的增敏(协同)作用。 结果： 工程菌DH5α-pBVnm23-H1继代培养50代后，遗传稳定性未发生改变；利用自有培养基配方和确定的发酵工艺，中试发酵菌体湿重得率在25g／L以上，同时目标蛋白的表达量在28％以上；利用Macro-prep DEAE Support 填料进行离子交换→亲和层析→凝胶过滤的纯化流程，最终目标蛋白的纯度可达99％以上，目标蛋白得率在50％以上；利用ATP+UDP反应体系测定的酶比活为：800U／mg，而以UTP+ADP反应体系测定的结果为：200U／mg；rhNDPK-α与顺铂联用，对小鼠肺腺癌LA795、人喉癌Hep2细胞的增敏效果分别为：2.06、1.60倍。 结论： 建立了目标蛋白得率高的中试发酵工艺和纯化工艺流程。同时确立了酶活性检测标准。分离纯化后的rhNDPK-α具有生物学活性。