论文部分内容阅读
肺癌是全世界发病率和死亡率增长最快，对人类健康和生命威胁最大的恶性肿瘤。为了探讨nm23-H1对“肺癌转移抑制级联”相关基因转录表达调控的影响及其分子机理，本研究应用构建了带有增强绿色荧光蛋白和野生型nm23-H1 基因的逆转录病毒真核表达载体PLXSN-nm23-H1-EGFP，成功转染到人高转移大细胞肺癌细胞株L9981中，成功构建转基因人肺癌细胞株L9981-nm23-H1,并应用RT-PCR技术对人肺癌细胞株L9981转染nm23-H1基因后5个“肺癌转移抑制级联”相关基因的转录水平进行验证。
本研究观察到：1．人高转移肺癌细胞株L9981具有nm23-H1基因的杂合性缺失。
2．应用质粒DNA的转化，酶切，连接技术成功构建了逆转录病毒真核表达载体pLXSN-nm23-H1-EGFP，将质粒pLxSN-nm23-H1-EGFP转染L9981细胞株后，nm23-H1-EGFP融合蛋白能够在L9981细胞株内持续、稳定和高效表达。
3．nm23-H1基因转染可使L9981细胞株中低氧诱导因子-1α (HIF-1α)mRNA表达显著下调(p=0.000)。
4．nm23-H1基因转染可提高L9981肺癌细胞株基质金属蛋白酶抑制物-2(TIMP-2)转录表达，但差异无统计学意义。nm23-H1基因转染可提高内皮抑素(endostatin)的转录表达水平，但差异不具有统计学意义(p=0.055)。
5．nm23-H1 基因转染可显著上调人肺癌细胞株L9981 膜蛋白Semaphorin-3F基因的转录表达(p<0.005)。
6．nm23-H1 基因转染人肺癌细胞株L998l后，窖蛋白-1基因( CAV-1)的转录表达水平无显著变化(P>0.05)。
结论：(1)人高转移肺癌细胞株L9981中存在nm23-H1等位基因的杂合性缺失。(2)nm23-H1基因可明显下调L9981肺癌细胞株中Hif-1α基因mRNA表达水平。(3)nm23-H1基因转染可以显著上调转Semaphorin-3F基因mRNA表达水平和上调endostatin基因mRNA表达水平；但对TIMP-2和CAV-1表达水平无明显影响。nm23-H1是“肺癌转移抑制级联”的上游转录调节基因，通过对下游基因的调控而抑制人肺癌细胞株L9981转移潜能。