长链非编码RNA在HPV16阳性的宫颈细胞系中的表达

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目的:  分析人乳头瘤病毒(human papillomavirus,HPV)16型阳性的宫颈癌(cervical cancer,CC)细胞系(SiHa)和人宫颈永生化鳞状细胞系(Ect1/E6E7)中长链非编码RNA(Long non-coding RNA,LncRNA)及信使RNA(Messenger RNA,mRNA)的表达差异,为探索研究lncRNAs的表达改变在高危型人乳头瘤病毒(High-risk human papillomavirus,HR-HPV)感染导致CC发生发展中的重要作用及其可能的分子机制奠定基础。  方法:  常规培养SiHa细胞和Ect1/E6E7细胞;提取RNA(Trizol方法)、纯化(mRNA-ONLY?Eukaryotic mRNA Isolation Kit,Epicentre)及质量检测(Agilent ND-1000及标准变性凝胶电泳方法);RNA标记(Arraystar RNA Flash Labeling Kit)与芯片杂交(Agilent SureHyb仪和Agilent DNA Microarray Scanner扫描软件);数据采集(Agilent Feature Extraction v11.0.1.1)软件)及其标准化(Agilent GeneSpring GX v12.1软件)后行差异表达分析(Agilent GeneSpring GX v12.1软件)以及功能分析(GO和KEGG通路分析);以RT-PCR方法验证SiHa细胞系与Ect1/E6E7细胞系、HPV16阳性的宫颈癌组织、HPV16阳性的正常宫颈组织以及HPV16阳性的宫颈癌前病变组织中与本实验室前期工作结果中筛选出的差异改变细胞因子相关的LncRNAs的芯片实验结果。  结果:  1.SiHa细胞系与Ect1/E6E7细胞系相比差异表达2倍及以上的上调lncRNAs共2804条,约占总上调LncRNAs的11.9%,差异表达2倍及以上的下调lncRNAs共2372条,约占总下调LncRNAs的12.1%。差异表达2倍及以上的上调mRNAs共2405条,约占总上调mRNAs的28.6%,差异表达2倍及以上的下调mRNAs共2505条,约占总下调mRNAs的27.4%;  2.SiHa细胞系表达上调的mRNAs中,生物学过程类中富集多细胞生物过程调节的mRNAs所占比例最大;细胞组分类中富集部分胞内组成的mRNAs所占比例最大;分子功能类中富集结合能力的mRNAs所占比例最大;  3.SiHa细胞系表达下调的mRNAs中,生物学过程类中富集单一有机体调节过程的mRNAs所占比例最大;细胞组分类中富集胞内构成的mRNAs所占比例最大;分子功能类中富集蛋白结合能力的mRNAs所占比例最大;  4.Pathway分析显示差异表达mRNAs共富集56条Pathway,其中上调mRNAs富集28条,下调mRMAs富集28条;  5.在细胞系中用RT-PCR方法验证lncRNA ENST00000566282、LncRNA NR_038974、LncRNA T287840、LncRNA ENST00000571370共4条差异表达的LncRNAs,其中lncRNA ENST00000566282、LncRNA NR_038974、LncRNA ENST00000571370与芯片结果一致,LncRNA T287840不一致;  6.在宫颈组织中用RT-PCR方法验证的lncRNA ENST00000566282、LncRNA NR_038974、LncRNA ENST00000571370共3条差异表达的LncRNAs,其中LncRNA NR_038974、LncRNA ENST00000571370与芯片结果一致,lncRNA ENST00000566282不一致。  结论:  1.SiHa细胞系与Ect1/E6E7细胞系相比存在大量差异表达的LncRNAs和mRNAs;  2.差异表达的LncRNAs可能在宫颈癌的发生发展中发挥重要作用,有可能可以作为新的宫颈癌早期诊断的标志物;  3.RT-PCR方法验证细胞系与宫颈组织中与细胞因子相关的ENST00000566282,NR_038974,T287840,ENST00000571370,其中NR_038974,ENST00000571370与芯片结果完全一致,说明基因芯片结果的可靠性,为进一步阐明细胞因子在CC发生发展免疫微环境中的作用打下了基础。
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