亚心型四爿藻叶绿体转化体系的构建与优化

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亚心型四爿藻(Tetraselmis subcordiformis)属绿藻门、绿藻纲、团藻目、衣藻科、四爿藻属,又被研究人员称为亚心型扁藻。亚心型四爿藻是广袤海洋中常见的一类单细胞的绿藻,在饵料与饲料、生物能源开发及药用研究等方面有着重要的生产及应用价值。本文针对亚心型四爿藻的叶绿体转化体系进行了系统的研究并对其进行了优化,对推动亚心型四爿藻及相关海洋藻类的基础研究进程并提高应用价值起到支撑作用。本文首先从亚心型四爿藻叶绿体基因组内克隆得到与光合作用相关的6个基因片段Prrn、PpsbA、TpsbA、TpsbC、TrbcL、psbA-5-UTR,以绿色荧光蛋白基因Gfp为报告基因,采用双酶切的方法对原核表达通用载体pMD-18T进行基因改造,构建了5组外源表达载体pRFA、pRFC、pRFL、pFC及pFL。同时构建不含报告基因的载体pRA、pRC、pRL、pC及pL。课题选用基因枪转化的方法将外源表达载体导入亚心型四爿藻叶绿体基因组内,构建亚心型四爿藻叶绿体遗传转化体系。以轰击金粉的亚心型四爿藻为空白对照,轰击载体pRA、pRC、pRL、pC及pL的亚心型四爿藻为阴性对照,根据观察到的绿色荧光蛋白在叶绿体中的瞬间表达情况来判断外源载体pRFA、pRFC、pRFL、pFC及pFL的表达效率。结果发现,在空白实验及阴性试验的对照下,只有外源载体pRFA、pFL在亚心型四爿藻叶绿体内表现出了生物学活性,并且外源载体pRFA中启动子序列Prrn与终止子序列TpsbA的调控能力要优于pFL中PpsbA与TrbcL的组合。
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