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纳米技术应用于免疫分析使检测的灵敏度大幅提高，为疾病的早期诊断开辟新的途径。用磁性Fe3O4纳米球代替微孔板作为抗体的固相载体富集待测目标物，在外加磁场的作用下实现目标物与基质的快速分离，课题将磁性Fe3O4纳米球与抗体偶联制备磁性免疫捕获探针;用功能化量子点荧光微球(FNS)和5-羧基四甲基罗丹明荧光染料(5-TAMRA)分别与抗体偶联，以制备荧光免疫检测探针，用其代替传统酶标抗体上的酶。基于磁性荧光免疫探针组建立荧光免疫分析法(FLISA)，可用于对血清样品中的人免疫球蛋白G(IgG)及DNA甲基化转移酶1(DNMT1)含量的检测。 采用1-（3-二甲氨基丙基）-3-乙基碳二亚胺盐酸盐/Sulfo-N-羟基琥珀酰亚胺(EDC/Sulfo-NHS)为偶联剂，制备磁性免疫捕获探针Fe3O4@YIgG(Fab)，制备300μL探针，Fe3O4、YIgG(Fab)、Sulfo-NHS、EDC的单因素优化用量分别为5mg、10μg、2mg、1mg;制备的捕获探针免疫活性良好;捕获探针的红外光谱(IR)、透射电镜(TEM)、粒径、Zeta电位均反映出Fe3O4与YIgG(Fab)偶联成功;偶联效率为85.2％，且磁性好。采用相似的偶联方法制备人IgG免疫检测探针FNS@YIgG(Fc)，制备300μL检测探针，FNS、YIgG(Fc)、Sulfo-NHS、EDC的正交优化的用量分别为1mg、30μg、20mg、5mg;检测探针的偶联效率为71.8％;免疫活性良好;其IR、粒径、Zeta电位及荧光光谱均说明YIgG（Fc)与FNS偶联成功。 采用EDC/Sulfo-NHS化学键合法制备磁性免疫捕获探针Fe3O4@McAbDNMT1，制备的DNMT1捕获探针的偶联效率为76.3％;McAbDNMT1偶联后仍然保持有免疫活性;DNMT1捕获探针的IR、粒径、Zeta电位表明McAbDNMT1与磁性Fe3O4纳米球偶联成功。另外，在5-羧基四甲基罗丹明琥珀酰亚胺酯大量过量的情况下，DNMT1兔多克隆抗体与其偶联产物为5-TAMRA@PcAbDNMT1，其偶联效率为100％;PcAbDNMT1偶联后仍然保持有免疫活性;DNMT1免疫检测探针的紫外-可见吸收光谱、Zeta电位均表明PcAbDNMT1与5-TAMRA偶联成功。 在成功制备两组探针的基础上，采用双抗体夹心法的实验原理，建立荧光免疫分析法(FLISA)检测人IgG，单因素法优化的免疫反应条件为:Fe3O4@YIgG(Fab)的稀释比为1:40;FNS@YIgG(Fc)的稀释比为1:4。在0.005～40ng/mL的范围内线性关系良好，线性方程为y=757.498+141.335x(y为RFU，x为1g(C人IgG)），相关系数r为0.9946;检测限为0.004ng/mL;板内和板间精密度（RSD）分别为6.3％～10.2％和2.6％～10.5％(n=6)，回收率分别为90.0％～101.9％和96.0％～106.6％(n=6);方法的特异性好;对建立的FLISA与MELISA、ELISA进行方法学比较;用建立的FLISA、MELISA与商品化ELISA试剂盒对人血清样品中的IgG含量进行分析，检测结果一致。 基于FLISA检测人IgG的实验基础上，采用双抗体夹心法的实验原理，建立检测血清中DNMT1的FLISA，在0.05～80ng/mL范围内线性关系良好，线性方程为y=222.046+48.323x(y为RFU，x为1g(CDNMT1》，相关系数r为0.9914;检测限为0.005ng/mL;FLISA检测DNMT1的板内和板间的RSD分别为4.7％～8.8％和1.6％～10．0％(n=6)，回收率分别为91.3％～102.4％和88.0％～98.8％(n=6);方法的特异性好;对建立的FLISA与MELISA、ELISA进行方法学比较;用建立的FLISA与商品化ELISA试剂盒检测血清样品中DNMT1的含量，结果一致。