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目的课题组前期研究已充分表明爱康方含药血清能诱导SK-MES-1细胞凋亡,本实验在此基础上,继予20%最佳浓度含药血清干预该细胞,观察爱康方含药血清对人肺鳞癌SK-MES-1细胞内Caspase-9、Bad、Survivin、mTOR蛋白表达及mRNA水平的影响,进一步探讨该方促进肺癌细胞凋亡可能的分子机制。方法将60只体重在220±20克的SPF级SD雄性大鼠采用随机分组的方式分为生理盐水对照组、环磷酰胺组、爱康方组以及爱康方联合环磷酰胺组,每组15只。按照前期课题组制备含药血清的方式,分别对以上四组大鼠进行生理盐水灌胃、环磷酰胺腹腔注射、爱康方灌胃以及爱康方灌胃联合环磷酰胺腹腔注射5天后制备含药血清。培养SK-MES-1细胞后,根据所加的不同组含药血清,将细胞分为:空白对照组(只加DMEM完全培养基)、对照组(生理盐水组)和实验组(爱康方组、环磷酰胺组、爱康方联合环磷酰胺组)。将细胞分别培养24小时,采用免疫细胞化学法、蛋白免疫印迹(Western blot)法检测Caspase-9、Bad、Survivin、mTOR蛋白表达,采用Real-time PCR法检测Caspase-9、Bad、Survivin、mTOR mRNA水平。结果1.爱康方对SK-MES-1细胞中Caspase-9、Bad蛋白表达及mRNA水平的影响免疫细胞化学法及Western blot法检测Caspase-9、Bad蛋白表达水平:实验组蛋白表达高于生理盐水对照组(P<0.05);实验组间比较,环磷酰胺组蛋白表达高于爱康方组(P<0.05),爱康方联合环磷酰胺组蛋白表达高于环磷酰胺组,差异有统计学意义(P<0.05)。Real-time PCR法检测Caspase-9、Bad mRNA水平:实验结果示,在Caspase-9和Bad中各实验组mRNA水平高于生理盐水对照组(P<0.05);实验组间比较,环磷酰胺组mRNA水平高于爱康方组(P<0.05),爱康方联合环磷酰胺组mRNA水平高于环磷酰胺组,差异有统计学意义(P<0.05)。2.爱康方对SK-MES-1细胞中Survivin、mTOR蛋白表达及mRNA水平的影响免疫细胞化学法及Western blot法检测Survivin、mTOR蛋白表达水平:实验组蛋白表达低于生理盐水对照组(P<0.05);实验组间比较,环磷酰胺组蛋白表达低于爱康方组(P<0.05),爱康方联合环磷酰胺组蛋白表达低于环磷酰胺组,差异有统计学意义(P<0.05)。Real-time PCR法检测Survivin、mTOR水平:实验结果示,在Survivin和mTOR中各实验组mRNA水平均低于生理盐水对照组(P<0.05);实验组间比较,环磷酰胺组mRNA水平低于爱康方组(P<0.05),爱康方联合环磷酰胺组mRNA水平均低于环磷酰胺组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论1.爱康方及爱康方协同环磷酰胺可以提高人肺鳞癌SK-MES-1细胞中Caspase-9和Bad蛋白表达和mRNA水平。2.爱康方及爱康方协同环磷酰胺可以降低人肺鳞癌SK-MES-1细胞中Survivin和mTOR蛋白表达和mRNA水平。3.爱康方可能通过调节细胞凋亡相关蛋白Caspase-9、Bad、Survivin的表达以及通过调节mTOR的表达从而抑制PI3K/AKT/mTOR信号转导途径来促进人肺鳞癌SK-MES-1细胞的凋亡,且该方与环磷酰胺发挥一定的协同作用。