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背景和目的：
溃疡性结肠炎(Ulcerative colitis, UC)是一种病因未明的肠道慢性非特异性炎症性疾病，临床表现以反复发作的腹痛、腹泻、粘液脓血便为特征，可伴随发热、呕恶、食欲减退等其它表现。近来研究指出Th17/Treg平衡失调是溃疡性结肠炎发生、发展的重要因素。miR-155是一个多功能基因,其功能由下游的基因介导,参与了体内各种生理病理过程,如免疫、炎症、肿瘤形成等。研究表明miR-155可以调节T细胞分化，影响Th17/Treg平衡，但是miR-155是否通过Jarid2/Wnt/β-catenin信号通路调节UC患者的Th17/Treg平衡的机制尚不十分清楚。
此实验研究是在DSS诱导的小鼠结肠炎中，探讨miR-155调节UC肠道Th17/Treg平衡的作用，以及复方苦参汤对此过程的干预作用研究。本实验为发现治疗溃疡性结肠炎的方法提供了新的思路。
研究方法：
1、通过磁珠分选得到naiveCD4+T细胞，分别加入各诱导因子诱导Th17和Treg细胞分化。在此基础上，将naiveCD4+T分为3组，分别予以转染miR-155抑制剂、阴性对照抑制剂及复方苦参汤含药学清干预，72h后流式检测分化结果，并用qRT-PCR检测miR-155及Jarid2表达量。
2、动物实验中，将48只C57小鼠适应性喂养一周后随机分为6组，每组8只：正常对照组、模型组、miR-155抑制剂组、阴性对照组、复方苦参汤组、美沙拉嗪组。第一天，除正常组外，其余各组予以3％DSS自由饮用7d，复方苦参汤组予以复方苦参汤灌胃7d，美沙拉嗪组予以美沙拉嗪灌胃7d；第5天，miR-155抑制剂组予以miR-155抑制剂腹腔注射3d，阴性对照组予以等量阴性对照剂腹腔注射3d。在造模期间，每天观察并记录小鼠疾病活动指数评分(DAI)，第8天处死所有小鼠，取各组小鼠结肠组织，测量长度并拍照留存，固定后行HE染色，通过原位杂交技术检测miR-155表达；qRT-PCR技术检测miR-155、Jarid2、Wnt1、β-catenin、sfrp1、IL-6、IL-17A、RORγt、TGF-β的表达；ELISA技术检测IL-6、IL-10、IL-17A、TGF-β蛋白表达；Westernblot技术检测Jarid2、Wnt1、β-catenin蛋白的表达；免疫荧光法检测结肠组织Jarid2表达量，免疫组化法检测Wnt1、β-catenin、sfrp1、TCF-4及CyclinD1表达量；取脾脏及肠系膜淋巴结进行流式检测Th17及Treg比例。
研究结果：
1、体外实验结果显示，与阴性对照组相比，miR-155抑制剂组、复方苦参汤含药学清组Th17细胞比例明显降低，而Treg细胞比例显著升高，miR-155表达水平有不同程度降低，Jarid2mRNA含量有所升高。
2、动物实验结果表明，与正常组相比，各组小鼠DAI均有所升高，说明造模成功；与模型组相比，其余各组小鼠DAI均有不同程度降低。与正常组比较，模型组脾脏及肠系膜淋巴结Th17比例显著升高(P＜0.01)，Treg比例稍升高；结肠组织miR-155含量明显升高(P＜0.01)；sfrp1、IL-6、IL-17A、RORγt的mRNA及sfrp1、IL-6、IL-17A的蛋白表达水平显著升高(P＜0.01)，而Jarid2、Wnt1、β-catenin、TGF-β的mRNA及蛋白质表达量明显降低(P＜0.01)，TCF-4、CyclinD1的蛋白表达明显降低(P＜0.01)；与Treg相关的抗炎因子IL-10的蛋白表达也明显降低(P＜0.01)。与模型组相比，miR-155抑制剂组、复方苦参汤组和美沙拉嗪组的脾脏及肠系膜淋巴结Th17比例显著降低(P＜0.01)，Treg比例显著升高(P＜0.01)；结肠组织miR-155含量明显降低(P＜0.01)；sfrp1、IL-6、IL-17A、RORγt的mRNA及sfrp1、IL-6、IL-17A的蛋白表达水平显著降低(P＜0.01)，而Jarid2、Wnt1、β-catenin、TGF-β的mRNA及蛋白质表达量明显升高(P＜0.01)，TCF-4、CyclinD1的蛋白表达明显升高(P＜0.01)；与Treg相关的抗炎因子IL-10的蛋白表达显著升高(P＜0.01)。
研究结论：
1、miR-155抑制剂可以缓解DSS诱导的小鼠结肠组织损伤
2、miR-155抑制剂影响DSS诱导的小鼠结肠黏膜组织中Th17及Treg的分化及功能
3、miR-155抑制剂可能通过Jarid2/Wnt/β-catenin信号通路调节Th17/Treg平衡
4、复方苦参汤可影响miR-155的表达并缓解DSS诱导的溃疡性结肠炎。
溃疡性结肠炎(Ulcerative colitis, UC)是一种病因未明的肠道慢性非特异性炎症性疾病，临床表现以反复发作的腹痛、腹泻、粘液脓血便为特征，可伴随发热、呕恶、食欲减退等其它表现。近来研究指出Th17/Treg平衡失调是溃疡性结肠炎发生、发展的重要因素。miR-155是一个多功能基因,其功能由下游的基因介导,参与了体内各种生理病理过程,如免疫、炎症、肿瘤形成等。研究表明miR-155可以调节T细胞分化，影响Th17/Treg平衡，但是miR-155是否通过Jarid2/Wnt/β-catenin信号通路调节UC患者的Th17/Treg平衡的机制尚不十分清楚。
此实验研究是在DSS诱导的小鼠结肠炎中，探讨miR-155调节UC肠道Th17/Treg平衡的作用，以及复方苦参汤对此过程的干预作用研究。本实验为发现治疗溃疡性结肠炎的方法提供了新的思路。
研究方法：
1、通过磁珠分选得到naiveCD4+T细胞，分别加入各诱导因子诱导Th17和Treg细胞分化。在此基础上，将naiveCD4+T分为3组，分别予以转染miR-155抑制剂、阴性对照抑制剂及复方苦参汤含药学清干预，72h后流式检测分化结果，并用qRT-PCR检测miR-155及Jarid2表达量。
2、动物实验中，将48只C57小鼠适应性喂养一周后随机分为6组，每组8只：正常对照组、模型组、miR-155抑制剂组、阴性对照组、复方苦参汤组、美沙拉嗪组。第一天，除正常组外，其余各组予以3％DSS自由饮用7d，复方苦参汤组予以复方苦参汤灌胃7d，美沙拉嗪组予以美沙拉嗪灌胃7d；第5天，miR-155抑制剂组予以miR-155抑制剂腹腔注射3d，阴性对照组予以等量阴性对照剂腹腔注射3d。在造模期间，每天观察并记录小鼠疾病活动指数评分(DAI)，第8天处死所有小鼠，取各组小鼠结肠组织，测量长度并拍照留存，固定后行HE染色，通过原位杂交技术检测miR-155表达；qRT-PCR技术检测miR-155、Jarid2、Wnt1、β-catenin、sfrp1、IL-6、IL-17A、RORγt、TGF-β的表达；ELISA技术检测IL-6、IL-10、IL-17A、TGF-β蛋白表达；Westernblot技术检测Jarid2、Wnt1、β-catenin蛋白的表达；免疫荧光法检测结肠组织Jarid2表达量，免疫组化法检测Wnt1、β-catenin、sfrp1、TCF-4及CyclinD1表达量；取脾脏及肠系膜淋巴结进行流式检测Th17及Treg比例。
研究结果：
1、体外实验结果显示，与阴性对照组相比，miR-155抑制剂组、复方苦参汤含药学清组Th17细胞比例明显降低，而Treg细胞比例显著升高，miR-155表达水平有不同程度降低，Jarid2mRNA含量有所升高。
2、动物实验结果表明，与正常组相比，各组小鼠DAI均有所升高，说明造模成功；与模型组相比，其余各组小鼠DAI均有不同程度降低。与正常组比较，模型组脾脏及肠系膜淋巴结Th17比例显著升高(P＜0.01)，Treg比例稍升高；结肠组织miR-155含量明显升高(P＜0.01)；sfrp1、IL-6、IL-17A、RORγt的mRNA及sfrp1、IL-6、IL-17A的蛋白表达水平显著升高(P＜0.01)，而Jarid2、Wnt1、β-catenin、TGF-β的mRNA及蛋白质表达量明显降低(P＜0.01)，TCF-4、CyclinD1的蛋白表达明显降低(P＜0.01)；与Treg相关的抗炎因子IL-10的蛋白表达也明显降低(P＜0.01)。与模型组相比，miR-155抑制剂组、复方苦参汤组和美沙拉嗪组的脾脏及肠系膜淋巴结Th17比例显著降低(P＜0.01)，Treg比例显著升高(P＜0.01)；结肠组织miR-155含量明显降低(P＜0.01)；sfrp1、IL-6、IL-17A、RORγt的mRNA及sfrp1、IL-6、IL-17A的蛋白表达水平显著降低(P＜0.01)，而Jarid2、Wnt1、β-catenin、TGF-β的mRNA及蛋白质表达量明显升高(P＜0.01)，TCF-4、CyclinD1的蛋白表达明显升高(P＜0.01)；与Treg相关的抗炎因子IL-10的蛋白表达显著升高(P＜0.01)。
研究结论：
1、miR-155抑制剂可以缓解DSS诱导的小鼠结肠组织损伤
2、miR-155抑制剂影响DSS诱导的小鼠结肠黏膜组织中Th17及Treg的分化及功能
3、miR-155抑制剂可能通过Jarid2/Wnt/β-catenin信号通路调节Th17/Treg平衡
4、复方苦参汤可影响miR-155的表达并缓解DSS诱导的溃疡性结肠炎。