【摘 要】
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构建人的抗流感病毒基因-MxA（Myxovirus resistance protein A）克隆真核表达载体pEGFP-C1,再将pEGFP-C1-MxA转染NIH-3T3细胞,通过G418抗性结合绿色荧光筛选出双阳性细胞克隆,用
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构建人的抗流感病毒基因-MxA（Myxovirus resistance protein A）克隆真核表达载体pEGFP-C1,再将pEGFP-C1-MxA转染NIH-3T3细胞,通过G418抗性结合绿色荧光筛选出双阳性细胞克隆,用本室制备的鼠抗MxA蛋白血清,对上述的细胞克隆进行Immunoblot分析和细胞免疫荧光/细胞免疫化学分析,并用RT-PCR技术对上述细胞中的MxA特异性序列进行分析鉴定,再用标准VSV病毒株攻击进行抗病毒效应试验。结果显示:pEGFP-C1-MxA转染的NIH-3T3细胞经G418抗性和绿色荧光蛋白筛选并经二轮亚克隆筛选了3个双阳性细胞克隆（1.4.5,4.3.6,3.2.16）和EGFP基因转染克隆;以MxA基因与鼠Mxl基因非同源区的序列设计的特异的引物进行RT-PCR试验三株均显阳性,Immunoblot分析三株细胞表现强阳性,免疫细胞化学分析显示上述三株细胞有大于98%的细胞表现为强阳性。VSV抗性试验表明:在感染50 PFU（plague formation Units）/孔的VSV后,在（4.3.6,3.2.16）细胞株均未发现空斑,而（1.4.5）细胞克隆中只出现少量空斑,对照组中出现大量的空斑。在0.001 TCID50 VSV对细胞感染48h后病毒产量分别是（4.3.6,3.2.16,1.4.5）3.5X103和4.8X103和5.3X105而对照组中病毒产量为3.5X106。三株细胞表现出强烈的抗VSV活性(TCID50提高了1000X)。上述的结果表明我们已经获得了MxA基因稳定转染NIH-3T3细胞株,并对VSV病毒具有很强的抗性活性,为进一步开展MxA基因抗其他病毒的研究提供实验基础。
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