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目的：构建人抗病毒基因MxA的重组慢病毒，体内及体外感染鸡精原干细胞（spermatogonial stem cells，SSCs），并将体外感染MxA基因的SSCs移植至受体公鸡睾丸内，检测MxA基因在睾丸内的分布及表达，并收集精液，检测精子DNA中MxA基因的存在情况，以期得到携带目的基因的转基因精子。
方法：本实验利用TOPO克隆技术，构建EGFP—MxA融合基因的重组慢病毒表达载体，经PCR及酶切鉴定EGFP—MxA插入载体的方向正确，且没有引起基因重排；重组载体导入真核细胞293FT细胞后，能表达EGFP—MxA融合蛋白特征性的颗粒状绿色荧光。在此基础上，通过脂质体介导，载体质粒与慢病毒包装质粒pLP1，pLP2和pLP/VSVG共转染293FT细胞，制备MxA重组病毒，超滤浓缩病毒，检测病毒滴度。分离培养25 d公鸡睾丸组织中的SSCs进行MxA重组病毒的体外感染，取出一定数量SSCs移植至预先用白消安处理的受体公鸡睾丸内，取睾丸组织进行RT—PCR检测目的基因的转录水平，并制作冰冻切片进行绿色荧光观察，免疫组化确定目的基因的分布与表达，同时采集受体鸡精液，提取精子中DNA，检测精液中目的基因的表达情况。本实验也同时进行了重组病毒对鸡精原干细胞的体内感染：将重组病毒直接注射至受体公鸡睾丸内，检测目的基因在睾丸及精液中的表达情况。
结果：
1．PCR及双酶切实验证明了EGFP—MxA融合基因重组慢病毒表达载体的成功构建。
2．比较不同载体质粒与脂质体浓度比例，不同包装细胞接种密度，病毒收集时间，以及不同包装细胞培养温度等不同实验条件下收集到的重组慢病毒滴度，确定最佳的病毒包装条件：
a．最佳载体质粒与转染脂质体的用量比例：载体质粒：包装质粒：脂质体（质量体积比）=1：3：4
b．最佳包装细胞接种密度：包装细胞接种密度=1×105个/ml
c．最佳包装细胞培养温度：包装细胞培养温度=37℃
d．病毒最佳收集时间：病毒收集时间=48 h
3．重组病毒进行超滤浓缩，病毒滴度可达到107 cfu/ml
4．体外感染鸡精原干细胞48 h后，荧光倒置显微镜下可观察到EGFP—MxA融合蛋白特征性的颗粒状绿色荧光，RT—PCR，免疫细胞化学法在转录水平和翻译水平证实了融合基因可在SSCs中正确表达。移植后的受体鸡睾丸RT—PCR及冰冻切片的免疫组化实验均检测到目的基因的转录与表达，且受体鸡精子DNA中成功检测到MxA基因的存在。
5．体内感染鸡精原干细胞后，RT—PCR及冰冻切片的免疫组化可检测到目的基因的转录及表达，但精子DNA中未能检测到MxA基因的存在。
结论：重组病毒通过体外感染SSCs，并移植到受体鸡体内，比直接注射受体鸡睾丸具有更高的基因传递效率，为进一步利用MxA抗病毒基因遗传修饰后的精原干细胞结合体内移植技术获得抗病毒转基因鸡奠定了良好的基础。