研究背景肺癌是当今世界发病率最高的肿瘤之一,也是最常见的肿瘤相关性死亡的原因,然而其预后并不理想。对于早期患者而言,根治性手术切除仍然是治疗的首选方法。早发现早治疗,可以帮助患者延长总的生存期。然而,绝大部分患者在就诊时都已处于晚期,肿瘤细胞已发生转移和扩散。即便是部分早期患者,行根治性手术治疗后也有可能出现转移或者复发的情况。肿瘤转移部位主要包括肺、骨、肝、脑等,这是影响患者预后的一个重要因素。因此,近年来对于肺癌转移的研究显得尤为重要。囊性纤维化跨膜电导调节因子(CFTR)是ATP结合盒转运蛋白超家族的成员,几乎在上皮组织中都有表达。在人类体细胞中,如果编码CFTR的基因发生突变,则会导致囊性纤维化(CF)疾病的发生,该病是一种致命的常染色体隐性疾病。虽然在过去几十年中,该病患者的寿命已经大大延长,但迄今为止尚未发现安全而有效的治疗手段。另一方面,在一些研究中发现,部分携带CFTR突变的患者存在胃肠道肿瘤的高发风险。同时,在不同的肿瘤中也发现了CFTR的启动子发生高甲基化的情况,这其中也包括了肺癌。这一现象提示我们,DNA甲基化所介导的CFTR的转录的沉默可能会影响肿瘤的发生和发展。值得注意的是,非小细胞肺癌中CFTR的突变和高甲基化区域大部分都已被鉴定出来。本课题通过荧光定量PCR检测于广州医科大学附属第一医院接受手术治疗的肺癌患者肿瘤组织的CFTR基因的表达水平,利用统计学方法分析其CFTR表达水平与肺癌临床体征和预后的相关性。为临床应用CFTR作为候选靶点治疗非小细胞肺癌及预测预后情况提供理论依据。为了进一步探究CFTR在肿瘤细胞中所起的作用,我们利用慢病毒介导RNA建立了CFTR沉默的A549细胞株,为后续的细胞功能实验、体外动物实验及信号通路研究做了前期准备工作。研究目的1.利用荧光定量PCR检测肺癌患者肿瘤组织中CFTR的表达情况,分期其表达量与肺癌临床体征和分期的相关性,为临床应用CFTR作为靶点治疗非小细胞肺癌的转移和预后提供理一定的论依据。2.利用慢病毒介导RNA建立CFTR沉默的A549肺癌细胞株,为后续的细胞功能实验、体外动物实验及信号通路研究做准备。研究方法1.应用荧光定量PCR的方法检测行手术治疗的165例非小细胞肺癌肿瘤组织和22例正常肺组织的CFTR的表达情况,随后在131例非小细胞肺癌的组织样品中进行独立验证。分析CFTR表达水平与肺癌临床体征、病理分期和预后的相关性。2.常规培养肺癌细胞株A549,利用慢病毒介导RNA建立CFTR沉默的细胞株模型,利用荧光定量PCR及蛋白免疫印迹法(western blot)验证细胞模型中CFTR m RNA和蛋白的表达差异。研究结果1.从荧光定量PCR的结果中,我们发现非小细胞肺癌的CFTR表达量出现下调(p=0.041)。肿瘤分期越高的患者中,CFTR的表达情况出现逐步下降(p<0.001)。从免疫组化蛋白测定的结果中,肿瘤患者分期越高,其CFTR蛋白的表达情况也逐步下降(p<0.001)。2.利用慢病毒介导RNA的方法成功建立了CFTR沉默的A549细胞株模型。从荧光定量PCR和蛋白免疫印迹实验成功验证了细胞株m RNA及蛋白的表达情况。研究结论这些结果表明CFTR基因在非小细胞肺癌中的发生发展过程中起着重要的作用。在晚期肿瘤及淋巴结出现转移的患者中,我们发现CFTR的表达情况出现明显的下调。结果提示低CFTR的表达可能预示肿瘤患者的不良预后。因此我们推断CFTR可以作为一个新的生物学预测指标来指导肺癌患者的治疗及预后管理。为了进一步探究其在肿瘤细胞中的作用,我们建立了稳定沉默的细胞株模型,为细胞功能及信号通路等研究做准备。