茯砖茶多糖的分离纯化及调节健康人与IBD病人的肠道菌群组成与代谢

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茯砖茶(FBT)又称为茯茶、边茶或边销茶,是黑茶的一种,被誉为西北各民族人民的生命茶。茯砖茶具有帮助食物消化、降脂减肥等有益作用。茯砖茶多制成砖型或者饼型等形状销往我国西北地区。如今,它已经被大众广泛接受。这不仅是因为它独特的味道,也因为大量研究发现它具有很多的有益的生物活性包括降血压、抗氧化、降脂减肥、抗肿瘤、促进免疫调节等多种对人体有益的功能。研究表明FBT可以调节脂质代谢,改善肠道功能并预防肥胖和高脂血症等代谢综合征。其中茯砖茶中的多糖(FBTPS)是FBT中的重要生物活性成分,有较强的抗氧化活性,可以在体内和体外显著调节肠道菌群的组成和丰度。但是目前研究的最多的是粗制FBTPS,有关FBTPS纯化组分研究的较少,因此纯化茯砖茶多糖的研究是十分有意义的。炎症性肠病(IBD)是一种慢性而且发病机制复杂的炎症病理状态,研究发现益生菌和短链脂肪酸(SCFAs)是治疗和恢复包括IBD在内的胃肠道疾病健康的重要物质。有研究发现茯砖茶多糖能在大肠被肠道微生物所利用产生大量SCFAs,促进肠道健康的益生菌的产生。因此本文主要从茯砖茶多糖的分离纯化、理化性质、抗氧化活性、纯化组分对肠道微生物的组成与代谢的影响以及粗多糖与纯化组分对IBD病人肠道微生物的影响比较这几个方面进行系统的研究,主要研究结果总结如下:1.茯砖茶多糖分离纯化组分的化学性质、细胞毒性及抗氧化活性的评价。FBTPS 通过 DEAE Sepharose Fast Flow 的柱色谱法用蒸馏水,0.1、0.3 和 0.5 mol/L的NaCl溶液洗脱,得到FBTPS-2和FBTPS-3两个主要组分。FB TPS-2和FBTPS-3的中性糖含量分别是51.57±1.52%和44.78±2.85%,糖醛酸含量分别为17.87 ±2.94%和 40.4±2.1%。FBTPS-2 的单糖组成主要有 Man、Rha、GalA、Glc、Gal、Ara及少量的Rib和GlcA,FBTPS-3的单糖组成主要由Man,Rha,GalA,Gal和Ara组成。FBTPS-2和FBTPS-3的分子量分别是937和741 kD。通过体外抗氧化活性实验和细胞实验比较两个纯化组分,我们发现FB TPS-3具有更优异的清除效果。在FBTPS的纯化组分中FBTPS-3有更高的抗氧化活性。2.茯砖茶多糖的纯化组分在体外厌氧发酵中调节肠道微生物的组成与代谢。我们采用16S rDNA测序技术与宏基因组测序技术,通过体外发酵实验研究发现,FBTPS-3可以被肠道内的菌群水解和利用,在以FB TPS-3作为碳源的体外发酵中,FBTPS-3 可以显著增加Bacteroides,Prevotella,Megasphaera,Dialister,Sutterella,Paraprevotella 的相对丰度,并降低 Firmicutes/Bacteroidetes 的比例。而且SCFAs的含量,特别是乙酸,丙酸和正丁酸的含量呈现显著增加的趋势。采用宏基因组测序分析,FBTPS-3可以显著促进菌群中的淀粉和蔗糖的代谢途(?)。FBTPS-3可以增加糖代谢酶的含量,例如UDP-半乳糖4-表异构酶和阿拉伯聚糖1,5-α-L-阿拉伯糖苷内切酶。3.茯砖茶多糖对IBD病人肠道菌群组成的调节作用的研究。通过FB TPS与FBTPS-3和IBD病人和健康人粪便的体外厌氧发酵实验,结果证明了茯砖茶多糖的不同组分是如何改善IBD病人的肠道环境的。在FBTPS的干预下,IBD患者粪便中的有益菌Bacteroidetes的丰度呈显著的降低,致病菌Proteobacteria的丰度有显著的增加。在FBTPS-3的干预下IBD患者粪便中的有益菌Bacteroidetes的丰度显著的增加,致病菌Proteobacteria的丰度却减少。对比两组多糖干预的实验结果,我们发现FB TPS-3可以调节IBD粪便的肠道菌群组成,使其更加接近健康人粪便的菌群组成。FBTPS-3还可以促进肠道菌群的代谢产物SCFAs的增加,有益于改善IBD病人的肠道内环境。茯砖茶多糖中纯化组分FBTPS-3可以作为改善IBD患者肠道环境的调节剂,为接下来的IBD疾病治疗奠定了科学基础。
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