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目的:
1、创伤弧菌溶细胞素(rVvhA)中类蓖麻毒素功能模序（VVCRicin B like）的表达、纯化及复性。
2、明确VVCRicinB like是否具有溶血活性。
3、阐明VVCRicinB like对HeLa细胞的细胞损伤相关机制。
4、了解VVCRicinB like抗体对重组蛋白HeLa细胞毒性的阻断作用。
方法:
1、IPTG诱导VVCRicin B like表达、Ni2+亲和层析法纯化、透析复性法复性，Western blot鉴定。
2、绵羊红细胞裂解实验检测VVCRicinBlike的溶血活性。
3、流式细胞仪检测VVCRicinB like作用于HeLa细胞后，细胞的凋亡及坏死率、细胞线粒体膜电位的变化及细胞内活性氧的变化。
4、纯化VVCRicinB like免疫日本大耳兔制备VVCRicinB like多克隆抗体。
5、硫酸铵盐析法、Sephadex G25分子筛法纯化多克隆抗体，Western blot鉴定重组蛋白的免疫原性，ELISA法确定抗体效价。
6、流式细胞仪检测多克隆抗体对VVCRicinB like细胞毒性的阻断作用。
结果:
1、大肠杆菌E coli BL21(DE3)(含pET-28a(+)-VVCRicinB like)成功表达VVCRicinB-like蛋白且目的蛋白分子量约为20kDa，其纯度已达93.4％以上。
2、VVCRicinB like无溶血活性。
3、VVCRicinB like对HeLa细胞具有细胞毒性:VVCRicinB like作用于HeLa细胞后，细胞凋亡率明显增大，HeLa细胞线粒体膜电位逐渐下降，细胞内活性氧水平亦逐渐增加。
4、成功制备VVCRicinB like多克隆抗体。
5、免疫印迹分析结果显示多克隆抗体能够特异性识别VVCRicinB lik。抗原且具有较好的免疫反应性，ELISA测定抗体效价为1∶3200。
6、多克隆抗体能够成功阻断VVCRicinB like对HeLa细胞的细胞毒活性。
结论:
VVCRicinB like无溶血活性;VVCRicinB like对HeLa细胞具有细胞毒活性;蛋白作用于HeLa细胞后，细胞凋亡率显著增大，线粒体膜电位逐渐下降及细胞内活性氧（ROS）明显升高;同时蛋白的细胞毒活性能被其相应抗体成功阻断。此段序列与创伤弧菌溶细胞素细胞毒活性相关，可能是溶细胞素发挥细胞毒活性的重要功能模序之一。