乳腺癌是女性发病率和死亡率最高的癌症之一。在临床上,化疗是其主要治疗手段。然而,化疗常用药物如紫杉醇、阿霉素等由于水溶性差,对肿瘤细胞缺乏选择性等因素,临床疗效受到了极大的限制,并且单一化疗手段容易产生耐药性并诱发癌症转移,最终导致癌症复发。为了改善这一问题,本研究构建了一种基于硫酸软骨素(Chs)的还原响应性的聚合物纳米粒。其中,紫杉醇(PTX)作为乳腺癌化疗模型药物;同时,该纳米给药体系中还引入了 P-糖蛋白(P-gp)抑制剂槲皮素(QT)和光敏剂二氢卟吩e6(Ce6),用以增强紫杉醇对耐药乳腺癌的化疗敏感性并通过光动力治疗(PDT)的协同作用增强对癌细胞的杀伤作用。以两端含有氨基的胱胺(CYS)作为连接臂,将羧酸化修饰之后的QT和Ce6分别通过酰胺化反应接枝到硫酸软骨素的骨架上,得到硫酸软骨素-胱胺-槲皮素/二氢卟吩(Chs-CYS-QT/Ce6,CQE)聚合物。通过1H-NMR、FT-IR 和 UV 能够证明聚合物的成功合成。此外,利用UV测定了 CQE聚合物中QT和Ce6的含量分别为(6.80±0.83)%和(5.17±0.68)%。利用探头超声-透析法制备载紫杉醇(PTX)的聚合物纳米粒,得到分散均匀的球形纳米粒,并通过动态光散射法(DLS)测得包载PTX的CQE聚合物纳米粒(PTX/CQENPs)粒径约为120.37nm,zeta电位约为-22.04mV。利用高效液相色谱法测定了 PTX/CQE NPs中PTX的载药量可以达到14.84%。此外,考察了CQENPs在不同还原条件下的粒径变化和PTX从PTX/CQENPs中的释放行为,结果表明,该纳米粒具有还原响应性,有望能够实现肿瘤微环境的快速释药。通过蛋白质免疫印迹实验结果发现,QT能够下调PTX耐药性乳腺癌细胞(MCF-7/ADR)中P-gp的表达,因此,PTX/CQENPs中的QT有望增强PTX对MCF-7/ADR的化疗敏感性。通过体外细胞毒、细胞凋亡、活-死细胞染色实验考察纳米载药体系的体外抗肿瘤活性,结果显示,QT的加入能够增强PTX对MCF-7/ADR细胞的杀伤作用,而且PTX/CQENPs加660nm光照处理后,MCF-7/ADR细胞的存活率相比于其他组明显降低,并且呈现了最高的细胞总凋亡率(37.55%),细胞杀伤作用明显强于单一化疗或者单一光动力治疗组,体现了 PDT和化疗联合治疗的优越性。利用活性氧检测探针DCFH-DA考察纳米粒产生细胞内活性氧(ROS)的能力,结果表明,在光照下,CQE NPs能够产生较多活性氧,从而发挥PDT的作用。而且,线粒体膜电位检测结果显示,PDT能够使线粒体膜电位下降。因此,CQE NPs能够在特定光照下产生活性氧,促进细胞的凋亡。利用共聚焦显微镜观察了纳米粒的细胞摄取和细胞内分布情况,结果显示,相比于游离药物,纳米粒能够有效的促进Ce6的细胞内摄取。此外,利用线粒体和溶酶体标记探针进行定位,发现纳米粒进入细胞后能够分布于线粒体中,这将更加有利于活性氧(ROS)发挥线粒体损伤作用从而切断P-gp的“能量供应”,促进PDT诱导的级联凋亡作用,使PDT对MCF-7/ADR细胞的杀伤作用得到极大地增强。此外,PDT产生的ROS能够破坏溶酶体膜,促进药物从溶酶体中逃逸。通过活体成像仪考察了荷瘤小鼠给药不同时间后,药物在体内的实时分布情况。与游离药物相比,纳米粒能够增强药物的肿瘤靶向性和滞留性,从而更好地在肿瘤部位发挥作用。建立了耐药乳腺癌小鼠模型,发现PTX/CQE NPs加光照组表现出最佳肿瘤抑制作用。此外,PTX/CQENPs对于乳腺癌4T1 BALB/c小鼠表现除了乳腺癌肺转移的抑制作用。因此该纳米载药体系具有良好的抗肿瘤应用前景。