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MYB转录因子是一个成员庞大的超家族,具有功能多样性,广泛参与植物体生长发育、次级代谢调控及逆境应答等途径。近年来,关于MYB转录因子参与植物色素合成机制日益成为研究焦点,红肉火龙果果实中含有丰富的色素,在抗氧化和抗癌方面具有重要的作用,但针对转录因子MYB参与调控火龙果色素合成途径的研究报道较少,因此挖掘火龙果色素合成的关键基因,为更一步深入探索火龙果色素合成调控的分子机制奠定基础。在前期工作基础上,本文以火龙果不同发育时期的果实为材料,利用qRT-PCR技术,根据表达趋势筛选色素积累相关的MYB转录因子,并采用RACE法克隆色素积累相关的MYB转录因子基因(HuMYB1841)全长序列;为了进一步探索该基因的功能,构建了用于酵母单杂交表达的载体,对深入探究MYB参与火龙果色素代谢的关键基因,以及通过基因工程创制含有丰富色素的新种质均具有重要意义。主要研究结果如下:1、采用稳定性评估软件geNorm和NormFind并结合qRT-PCR方法,从17种候选内参基因中筛选出火龙果果实不同发育期的内参基因为TBP2与YLS8。2、通过qRT-PCR与转录组数据相结合的分析方式,从基因表达水平上阐述了4个MYB转录因子在火龙果果实不同发育时期时空性表达情况。MYB1841在红肉品种-紫红龙的果实发育过程中,其表达量呈现先上调再下调,并且在破色期(H2)表达量达到最高值,而在白肉品种-晶红龙果实中表达量极低或不表达,该结果与甜菜色素合成途径中的关键基因CYP450趋势相似;MYB1222与MYB1841表达趋势较一致,但表达丰度较低;MYB636和MYB1082在火龙果果实发育期中整体表达量不稳定,呈现波动趋势;因此,推测MYB1841基因可能与火龙果色素合成密切相关。3、利用RACE技术,克隆出MYB1841全长序列并命名为HuMYB1841,全长911 bp,ORF 639 bp,共编码212 aa;生物信息学分析表明,蛋白序列中具有MYB家族结构域,且属于R2R3类转录因子,HuMYB1841在MYB家族保守区域上同源性较高。4、采用PEG介导的电化学法,将构建的融合蛋白表达载体(pBWA(V)HS-HuMYB1841-GFP)与空载(pBWA(V)HS-GFP)转入到拟南芥原生质体中共培养,激光共聚焦显微镜下观察显示,HuMYB1841蛋白具有核定位信号,与生物信息学软件预测结果一致,此结果为进一步理解HuMYB1841基因功能提供了新信息。5、用常规PCR法克隆了参与甜菜色素合成途径的关键基因CYP450的启动子序列,序列长度为1547 bp,并用在线软件对启动子内主要调控元件进行预测,结果发现有多处MYB转录因子结合位点。6、为进一步探究基因HuMYB1841的功能,构建了用于酵母单杂交实验的诱饵载体(pAbAi-CYP450)和猎物载体(pGADT7-HuMYB1841),此外成功构建了诱饵酵母菌株。