白血病是临床常见的血液系统恶性肿瘤，在当前化疗条件下尽管70～80％初发患者能在短期内得到缓解，但大部分患者因化疗药物的严重毒副作用被迫中断治疗或因肿瘤细胞对化疗药物产生耐药而导致复发，因此寻找高效低毒的新型抗肿瘤药物成为白血病治疗的重要课题之一。小檗胺(Berbamine，BBM)是一种从中药中提取的双苄基异喹啉类生物碱，近期研究表明小檗胺及其衍生物均属钙调素拮抗剂，在体外对包括HL-60、U937、脑胶质瘤细胞等在内的多种细胞具有明显的增殖抑制和逆转多药耐药作用，表现出明显的抗肿瘤特性。为明确小檗胺抗白血病作用及其可能机制，我们以急性红白血病细胞株K562为对象进行研究。 材料与方法 实验共设小檗胺实验组、空白对照组及阳性或阴性对照组，小檗胺粉剂工作母液浓度1mg／ml，实验浓度范围0.02～200μg／ml，主要实验浓度为4μg／ml、8μg／ml和12μg／ml，监测时间范围0～72小时，主要时间监测点 为0、6、12、24、48、72 ’J’时。K562细胞、K562／adr细胞和HL－60细胞由 浙江大学肿瘤研究所提供。 我们以MTT法测定小劈胺对K562、K562／adr、HL60、急性髓细胞白血 病来源的原代白血病细胞及正常骨髓细胞的增殖抑制作用，并求得其72 ’J’ 时半数抑制浓度门。）。用形态学、流式细胞仪（FCM）测定小劈胺对 K562 细胞的凋亡诱导作用，RT－PCR8ug加 测定sug／ml ’J’ffi胺对细胞癌基因 bclZ 及bax表达，并用筑巢式PCR（nested－PCR）测定对K562细胞的特征性融合 基因仇／abl表达，最后用FCM测定12ug加l小梁胺作用K562细胞24小时 其半眯大冬酶Caspase 3的表达。 结 果 实验结果显示小巢胺能时间浓度依赖性地抑制K562细胞增殖，其IC。。 值为5二3qg／ml，耐阿霉素的K562／adr细胞及原代白血病细胞对小壁胺也同 样敏感，其1Q。值分别为10．97卜合1和6．sl卜分1。同时小壁胺对正常骨髓 造血细胞抑制作用极小，其 IC。。值为 103石spg／thl，与 K562细胞敏感株相 比高 15石倍。 形态学检测结果显示小奖胺能快速诱导 K562细胞凋亡，4pg／ffil ’J’M胺 处理K562细胞6小时G加sa染色后即可见细胞染色质浓聚，核裂解，凋亡 小体形成。FCM结果显示 4pg／ml ’J’M胺作用 K562细胞 24 ’J’时和 72 ’J＼时 的细胞凋亡率分别为 40％和 25．3％，12pg／ml小棠胺作用 24 ’J’时和 72小 时的细胞凋亡率分别为门．5％和70．7％，表明小棠胺对K562细胞的凋亡诱 导作川呈一定的时间剂量依赖性。凋亡相关基因的检测显示K562本身表达 bax而不表达伙－2，经 spg／nil ’J’M胺处理至 72 ’J、时未见伙－2表达，而处 理前后 bax的表达量也无明显改变。8卜g／ml小棠胺作用 K562细胞后 her／abl 融合基因的表达量降低，72 小时的半定量比值由处理前的 二．284降低至 0．506。同时，K562细胞内半肌无冬酶 Caspase 3的表达量在 8卜g／ml ，J’＃胺 2 作用24小时后经FCM测定由18．36％升高至38．25％，增高2刀8 倍 （p＜0．0（））。 结 论 我们认为小肇胺对K562、K562／adr、HL－60、原代白血病细胞均有显 著的增殖抑制作用，而对正常骨髓细胞的抑制作用极小。小壁胺对K562细 胞的增殖抑制作用与诱导细胞凋亡有关，其机制并不通过影响细胞b。12 和bax的表达实现，而是通过抑制K562细胞仇／abl融合基因的表达并促 进细胞CasPase 3的表达实现，凋亡诱导作用是小棠胺抑制白血病细胞增 殖的重要机制之一。