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目的:阵发性睡眠性血红蛋白尿症(Paroxysmal nocturnal hemoglobinuria,PNH)是一种获得性造血干细胞基因突变的克隆性疾病,其病理机制为PIG-A基因突变致膜锚链蛋白缺失而引发功能性蛋白缺乏。临床表现为血管内溶血、骨髓衰竭及易形成血栓,血栓形成是危害性最大最常见的致死原因。血栓形成机制尚不明确,目前认为可能与补体介导的溶血、一氧化氮(NO)的消耗、内皮损伤、纤溶系统失调、血小板激活等因素有关,它们均直接或间接源于溶血。近年研究发现“间接”膜锚链蛋白酶3(proteinase 3,PR3)是一种重要的抗凝调节因子,在PNH患者中表达明显异常。本研究从基因水平和功能蛋白表达水平检测PNH患者PR3,探究其在PNH患者血栓形成中的作用。方法:本研究以27例PNH患者为研究对象,25名为同期正常对照组,采用流式细胞术(flow cytometry,FCM)检测中性粒细胞膜表面锚链蛋白NB1和PR3的表达;采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测PNH患者及同期正常对照组血浆中NB1、PR3和凝血酶受体1(PAR-1)的浓度;采用实时定量聚合酶链式反应技术(real-time PCR,RT-PCR)检测PNH患者及同期正常对照组PR3和NB1上游m RNA的表达,采用免疫印迹技术(Western blot,WB)检测PNH患者及同期正常对照组中性粒细胞中总蛋白PR3的表达。整理并记录患者和同期对照组D-二聚体检测指标,并将其与PR3、PAR-1做相关性分析。结果:1.PNH患者中性粒细胞膜上PR3、NB1水平降低PNH患者PNH细胞(CD59-PR3+/CD59-)膜上PR3的水平[(70.40±29.86)%]低于同期对照组正常细胞(CD59+PR3+/CD59+)膜上的水平[(93.28±10.53)%](P=0.01);PNH患者CD59+细胞(CD59+PR3+/CD59+)膜上PR3的水平[(85.68±22.21)%]与同期对照组正常细胞(CD59+PR3+/CD59+)膜上的水平[(93.28±10.53)%]无显著性差异(P=0.131);PNH患者PNH细胞(CD59-PR3+/CD59-)膜上PR3的水平[(70.40±29.86)%]低于CD59+细胞(CD59+PR3+/CD59+)膜上的水平[(85.68±22.21)%](P=0.046)。PNH患者PNH细胞(CD59-NB1+/CD59-)膜上NB1的水平[(20.61±26.07)%]低于同期对照组正常细胞(CD59+NB1+/CD59+)膜上的水平[(67.72±19.65)%](P=0.001);PNH患者CD59+细胞(CD59+NB1+/CD59+)膜上NB1的水平[(72.25±25.62)%]与同期对照组正常细胞(CD59+NB1+/CD59+)膜上的水平[(67.72±19.65)%]无显著性差异(P=0.46);PNH患者在PNH细胞(CD59-NB1+/CD59-)膜上NB1的水平[(20.61±26.07)%]低于在CD59+细胞(CD59+NB1+/CD59+)膜上的水平[(72.25±25.62)%](P=0.001)。2.PNH患者血浆中PR3的浓度(2262.72±802.80)pg/ml低于同期对照组(3292.92±651.68)pg/ml(P=0.001),血浆中NB1的浓度较正常对照组无明显改变(P=0.32)。3.PNH患者PR3、NB1的m RNA的水平均较同期对照组无显著差异(P=0.629,P=0.836)。4.PNH患者中性粒细胞总蛋白PR3的水平较同期对照组无显著差异。5.PNH患者血浆中PAR-1浓度水平(1.38±0.96)ng/ml高于同期对照组(0.47±0.29)ng/ml(P=0.001)。6.5例PNH伴血栓患者D-Dimer水平高于22例PNH不伴有血栓的患者(P=0.049)。7.PNH患者D-dmier与中性粒细胞膜PR3水平呈负相关(r=-0.503 P=0.028),D-dmier与PAR-1水平正相关(r=0.65 P=0.002),PR3与PAR-1水平呈负相关(r=-0.456 P=0.043)。结论:(1)PNH患者间接膜锚链蛋白PR3明显减低;(2)PNH患者血浆低水平PR3,高水平PAR-1与血栓关系密切。