人食管鳞癌细胞株RIZ1基因启动子区甲基化状态的研究

来源 :天津医科大学 | 被引量 : 1次 | 上传用户:lvchao222
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目的:探讨六种人食管鳞癌细胞株KYSE150, KYSE510, TE13, EC9706, CaEs17和EC109中RIZ1基因启动子区的甲基化状态;应用特异性DNA甲基转移酶抑制剂5-杂氮-2’脱氧胞苷(5-Aza-CdR)处理RIZ1基因启动子区存在高度甲基化的细胞株,观察其对RIZ1基因的转录调控作用;并探讨其对该细胞生长增殖的影响。方法:1.甲基化特异性聚合酶链反应(methylation-specific PCR, MSP)检测KYSE150, KYSE510, TE13, EC9706, CaEs17和EC109等六种人食管鳞癌细胞株中RIZ1基因启动子区的甲基化状态,筛选出RIZ1基因启动子区高度甲基化的细胞株进行后续实验。2.应用5-Aza-CdR对筛选出的RIZl基因启动子区高度甲基化的人食管鳞癌细胞株进行处理,应用实时定量PCR (Real-time PCR)检测处理前后RIZ1mRNA表达量的变化。3.四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测5-Aza-CdR对该人食管鳞癌细胞株生长增殖的影响。结果:1.六株人食管鳞癌细胞株中TE13, CaEs17, EC109三株细胞RIZ1基因启动子区存在高度甲基化,选取TE13进行后续实验。2.5-Aza-CdR处理细胞株TE-13后,RIZ1mRNA表达量较处理前上调。3.MTT检测发现,5-Aza-CdR可抑制人食管鳞癌细胞株TE-13的生长增殖,并在一定范围内随浓度增大和时间延长抑制作用变明显。结论:启动子区高度甲基化是人食管鳞癌细胞株TE13RIZ1基因表达沉默的重要原因,去甲基化试剂5-Aza-CdR能逆转人食管鳞癌细胞株TE13RIZ1基因启动子区高度甲基化状态,使RIZ1mRNA表达上调,5-Aza-CdR能抑制TE13细胞的生长增殖,并在一定范围内呈浓度和时间依赖性。
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