第一部分 理论研究 中医药治疗糖尿病视网膜病变的用药数据分析目的:中医治疗糖尿病视网膜病变（diabetic retinopathy,DR）有其独特的优势,且治疗效果较显著,但是在用药方面缺乏系统的归纳分析。本研究以近10年中医治疗DR的文献为基础,以文献中的方药为分析对象。以中医传承计算平台V3.0软件分析方剂涉及的药性、药味、归经的用药规律,利用关联规则计算公式计算当归补血汤中两种主要成分“黄芪”、“当归”在DR治疗中的关联性。方法:选取来源于2010年至2019年10年数据库所收录的文献。选取糖尿病视网膜病变相关的关键词进行检索,经过初步筛选获得初始文献。运用word、excel软件对所得数据进行收集整理,并通过中医传承计算平台V3.0对药性、药味、归经进行频数分析,可初步推断出治疗DR的高频药物特点。并初步判断当归补血汤中的两种成分是否符合近10年对于DR治疗相关的方剂特征。对黄芪和当归的关联性进行统计学计算。通过最终的数据分析,分析当归补血汤的单味药物成分是否符合对DR治疗的药物特征,计算两单味药物黄芪、当归的组方提升度,确定两者的组方对于DR治疗是否具有临床研究价值。结果:用药频次:对筛选出的73篇文献中的中药进行统计,共收集到96首方剂,共得到中药148味,使用总频次为998次,其中使用频率排前十的药物分别是:生地黄、丹参、黄芪、三七、山药、枸杞子、牡丹皮、山茱萸、当归、熟地黄;药性以寒性为主,其次是温、平性,药味着重于甘、苦、辛,归经则以肝、肾、心、肺、脾五经为主;当归补血汤中,黄芪、当归关联性的计算分析:对筛选出的73篇文献中的中药进行统计,共收集到96首方剂,共得到中药148味,其中黄芪出现37次,当归出现28次,两者在同一方剂中同时出现14次,置信度指前项与后项同时出现的次数占前项出现次数的百分比为:14÷37,提升度表示置信度与后项出现的次数占总方剂数的百分比的比为:（14÷37）/（28÷96）≈1.297。结论:通过最终对相关文献的整理分析,当归补血汤的单味成分符合对DR治疗的药物特征,两单味药物的组方特点提升度大于1,两者的组方对于DR治疗具有相关性,研究价值较高。第二部分 实验研究实验一 研究高糖缺氧因素对体外培养大鼠视网膜微血管内皮细胞不同阶段的影响并确定高糖缺氧模型建立时间目的:研究高糖缺氧因素对体外培养大鼠视网膜微血管内皮细胞不同阶段的影响并确定高糖缺氧模型建立时间。方法:培养液分为空白对照组和高糖缺氧组,加入实验各分组的培养液,放入37℃二氧化碳培养箱培养分别培养1d、2d、4d后,终止培养。通过MTT法检测OD值大小,以此来检测细胞增殖情况,分析确定模型成功建立的时间。结果:在1d时,空白对照组与高糖缺氧组的细胞OD值差异具有统计学意义（P为0.00）,且空白对照组的OD值大于高糖缺氧组,说明高糖缺氧因素此时对细胞的增殖以抑制作用为主。2d时,两组间比较差异无统计学意义（P为0.12）,表明此时高糖缺氧因素对细胞总体的抑制效应减弱,经过与正常组比较发现,此时对细胞总体的效应趋于无,即不对细胞增殖起促进作用,也不对细胞增殖起抑制作用。第4d时,两组比较差异具有统计学意义（P为0.00）,且高糖缺氧组的OD值明显大于空白对照组,提示此时高糖缺氧因素对细胞增强起促进作用。结论:高糖缺氧因素对体外大鼠视网膜微血管内皮细胞的增殖,在1d时起抑制作用,2d时不发挥作用,4d时起促进作用,高糖缺氧模型建立时间为4d。实验二 研究当归补血汤对大鼠视网膜微血管内皮细胞在高糖缺氧作用下的影响目的:研究当归补血汤对高糖缺氧状态下大鼠视网膜微血管内皮细胞迁移、增殖、血管发生的作用。方法:选取第3代处于对数期的大鼠视网膜微血管内皮细胞,随机分为空白对照组、高糖缺氧组、高糖缺氧+低剂量含药血清组、高糖缺氧+中剂量含药血清组、高糖缺氧+高剂量含药血清组共5组,每组设3个孔,加入实验各分组的培养液,分别通过内皮细胞迁移实验、内皮细胞增殖实验、内皮细胞血管发生实验的实验步骤进行处理,放入37℃二氧化碳培养箱培养培养4d后,终止培养后进行检测,实验重复3次。结果:4d时,细胞迁移数、增殖及血管发生情况,均符合从空白对照组、高、中、低浓度含药血清组、高糖缺氧组依次增加,提示高糖缺氧因素对大鼠视网膜微血管内皮细胞起正向促进作用,在应用当归补血汤含药血清后,高糖缺氧因素对细胞的正向促进作用得到改善,且随药物浓度的升高,改善作用逐渐增强。在低浓度时,此药物发挥作用有限,与高糖缺氧组差异尚不具备统计学意义,但随着浓度升高,效果渐显著,不同浓度组之间差异有统计学意义,在最高浓度时,达到最佳疗效,此时与空白对照组比较,达到两者差异无统计学意义的效果。结论:细胞迁移、内皮细胞增殖、内皮细胞血管发生实验表明,在4d时,高糖缺氧对视网膜微血管内皮细胞以促进作用为主,而当归补血汤含药血清也可以对抗此促进作用,并与浓度呈正相关。实验三 当归补血汤对大鼠视网膜微血管内皮细胞在高糖缺氧作用下保护机制的研究目的:研究当归补血汤通过IL-1β→COX-2/PI3K/AKT→VEGF途径对高糖缺氧状态下大鼠视网膜微血管内皮细胞的作用机制。方法:选取第3代处于对数期的大鼠视网膜微血管内皮细胞,随机分为空白对照组、高糖缺氧组、高糖缺氧+低剂量含药血清组、高糖缺氧+中剂量含药血清组、高糖缺氧+高剂量含药血清组共5组,每组设3个孔,加入实验各分组的培养液,放入37℃二氧化碳培养箱培养培养4d后,终止培养,分别用western blot和荧光定量PCR法分别检测各组细胞中PI3K、Akt、IL-1β、VEGF、COX-2蛋白及m RNA的含量。结果:western blot和荧光定量PCR实验表明,在4d时,高糖缺氧对视网膜微血管内皮细胞的蛋白和m RNA以促进作用为主,而当归补血汤可以对抗此促进作用,并与浓度呈正相关。结论:当归补血汤药物血清可能通过降低高糖缺氧条件下大鼠视网膜微血管内皮细胞中IL-1β、COX-2、PI3K、AKT、VEGF基因表达量和IL-1β、COX-2、p-PI3K、p-Akt、VEGF蛋白表达水平,发挥抑制视网膜微血管内皮细胞迁移、增殖、及血管发生的作用,证明当归补血汤可通过IL-1β→COX-2/PI3K/AKT→VEGF途径从而抑制视网膜新生血管生成,以实现防治PDR的作用。