论文部分内容阅读
蛋白酶体降解途径是细胞中蛋白质降解的一种重要的途径，蛋白酶体在细胞质和细胞浆中都大量存在。蛋白酶体对细胞具有重要的作用，它参与细胞周期、细胞凋亡、信号转导、转录调控等众多生理过程。蛋白酶体是由核心部分20s蛋白酶体及其激活因子构成，激活因子包含19s、11s及PA200。REGγ作为11s家族中的一员，它可以激活20s蛋白酶体的碱性活性位点。
传统观点认为REGγ蛋白激活20s蛋白酶体仅可以降解一些短肽，因此相对于其他的蛋白酶体激活因子，关于REGγ研的研究相对少一些。在2006年XiaotaoLi等人研究发现REGγ蛋白可激活20s蛋白酶体降解蛋白质SRC-3，这是首次证明REGγ蛋白质可以降解细胞内完整的蛋白质。此后又相继有研究证明REGγ蛋白可以降蛋白质p21、p19、MDM2、HCV等。这些研究成果表明，REGγ可参与细胞内大量的生理过程。
REGγ参与各种生理过程，其中一部分原理是通过对靶蛋白的蛋白水平调控来实现的。因此关于REG杂靶蛋白的研究也是REGγ蛋白质研究的重要方向之一。在本课题中我们通过探索各种高效液相色谱的纯化方法包括：离子交换、分子筛、亲和层析、疏水层析等纯化出了纯度较高的20s蛋白酶体和REGγ蛋白。在确定纯化的20s蛋白酶体和REGγ蛋白为聚合状态后，我们在体外将20s蛋白酶体和REGγ蛋白结合组成一个降解体系，利用已经证明的靶蛋白p21验证了它们的活性；同时首次利用体外实验证明REGγ蛋白可以降解病毒蛋白HCV。这些蛋白质的降解证明了降解体系的活性。这个体系的建立为靶蛋白的筛选提供了基础，同时也可用于蛋白质修饰的研究。