研究背景与目的弥漫性神经胶质瘤是成人中枢神经系统最常见的恶性肿瘤,且患者预后较差。胶质瘤的组织病理分型和分级诊断与患者的预后明确相关。然而,肿瘤的广泛异质性使得同一组织病理诊断的胶质瘤患者由于具有不同的分子病理突变和表观遗传改变而导致预后可能截然不同。因此筛选胶质瘤的新的分子标记物,完善胶质瘤的分子病理诊断分型十分必要。我们的前期研究通过转录组测序筛选出胶质瘤肿瘤中心组织对比肿瘤周边水肿带以外的相对正常脑组织中的肿瘤细胞的差异表达基因TMEFF2。TMEFF2基因在其它肿瘤中被报道能发挥抑制肿瘤细胞增殖的作用。但TMEFF2在多种肿瘤细胞中因发生DNA甲基化而导致其表达受到抑制,从而促进了肿瘤的进展。目前尚未有相关的研究明确胶质瘤中TMEFF2基因的表达水平及其与DNA甲基化水平的相关性。另外,TMEFF2基因在胶质瘤中的生物学功能及其与胶质瘤患者预后的相关性尚未明确。本研究旨在阐述TMEFF2基因在胶质瘤中的DNA甲基化水平及mRNA表达水平,并进一步探究二者间的相关性。同时本课题在胶质母细胞瘤细胞中验证TMEFF2基因的生物学功能,并探讨TMEFF2 DNA甲基化水平与胶质瘤患者预后的相关性,旨在为胶质瘤的分子病理诊断分型和患者预后预判提供新的分子标记物。研究内容与方法本课题通过免疫组化（Immunochemistry,IHC）和实时荧光定量PCR（Real-time PCR,RT-PCR）检测临床胶质瘤患者的手术标本组织中 TMEFF2 基因的表达,并采用亚硫酸氢盐扩增子测序（Bisulfite Amplicon Sequencing,BSAS）鉴定胶质母细胞瘤（Glioblastoma,GBM）细胞中TMEFF2 DNA甲基化状态。同时在GBM细胞中抑制TMEFF2的甲基化水平检测其mRNA水平的改变,并用siRNA和CRISPR-CAS9技术抑制TMEFF2的表达后检测GBM细胞的增殖能力变化。另外,通过TCGA数据库筛选与TMEFF2甲基化水平相关的胶质瘤亚型并用临床标本进行验证,应用Kaplan-Meier生存分析探讨TMEFF2甲基化水平对胶质瘤患者预后的影响。结果IHC结果提示70.67%（53/75）的胶质瘤肿瘤中心组织中TMEFF2低表达（P<0.001）。与SVG p12细胞相比,GBM细胞中TMEFF2 DNA启动子的甲基化水平更高（P<0.001）。DNA甲基化抑制剂和DNA甲基转移酶DNMT1干扰序列均可显著抑制LN229和T98G细胞的TMEFF2 DNA甲基化,并促进其mRNA表达。siRNA干扰U87MG和原代GBM细胞的TMEFF2表达后GBM细胞的增殖能力上调。CRISPR-CAS9敲除LN229细胞的TMEFF2基因后SAPK/JNK通路活化,细胞增殖能力上调。TCGA数据库胶质瘤样本中TMEFF2DNA甲基化分别与IDH1、ATRX和TP53突变负相关,而具有IDH1/ATRX/TP53联合突变亚型的胶质瘤的TMEFF2 DNA甲基化水平更低（P<0.001）。生存分析提示,TMEFF2DNA甲基化水平与胶质瘤患者预后负相关（P<0.001）,IDH1突变型胶质瘤患者中TMEFF2甲基化水平低的患者预后更好。结论本课题的研究结果提示胶质瘤中TMEFF2基因的DNA甲基化可能与肿瘤恶性进展相关。TMEFF2 DNA甲基化水平可以作为胶质瘤的分子病理分型和预后判断的新的分子标记物。在胶质瘤中针对TMEFF2DNA甲基化水平的相关检测可能具有临床分子病理诊断意义。