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作为内源性的生长激素，促红细胞生成素(EPO)对人体的红细胞生成具有重要的调节作用。1985年，随着在中国仓鼠卵巢细胞(CHO)内EPO基因的成功克隆及表达，重组人促红细胞生成素(rHuEPO)出现并迅速在临床治疗中获得了广泛的应用；同时rHuEPO提高血液携氧能力的特点也促使其在竞技体育中被一些运动员作为兴奋剂而使用。因此，为了能在临床治疗中监控rHuEPO的疗效以及在竞技体育中限制rHuEPO的滥用，有必要采用灵敏的分析手段对生理体液中的EPO进行检测。本论文以制备针对rHuEPO不同决定簇的多种抗体为基础，探讨了适于临床检测EPO的多种酶联免疫吸附分析法(ELISA)以及改进现有EPO兴奋剂检测的方法。本论文的主要结论和创新之处在于：
1.rHuEPO单克隆抗体的制备。以rHuEPO与牛血清白蛋白(BSA)的偶联产物免疫小鼠，采用传统的杂交瘤抗体制备技术获得了针对rHuEPO的单克隆抗体(F3-mAb)；该抗体属于IgM类亚型，亲和常数为2.1×108L/mol。与原先用rHuEPO直接免疫小鼠制备的IgG抗体相比，F3-mAb的免疫反应性有了明显的提高，证实了偶联BSA后的rHuEPO确实提高了机体对抗原的免疫应答。同时，以所获得的抗体为基础，建立并比较了三种检测EPO的ELISA方法，其中间接非竞争ELISA的检测限达到29pg/mL，可以进一步发展成为适于临床检测EPO含量的方法。
2.针对rHuEPO的单链抗体(scFv)的制备。首次利用噬菌体抗体库技术，通过三轮淘选获得了针对rHuEPO的scFv。单链抗体的分子量用SDS-PAGE法测得为29kDa，而其相应的亲和常数以间接竞争ELISA测得为1.0×108L/mol。双抗体夹心ELISA的检测结果表明：scFv具有与相关样品中rHuEPO进行特异性结合的能力；而去糖基化的rHuEPO与完整rHuEPO的对照实验则进一步证实了scFv-B2所识别的抗原决定簇是rHuEPO的肽段部分。
3.针对rHuEPO糖基特异性抗体筛选的初步研究。在上述已经获得表达针对rHuEPO单链抗体噬菌体次级库的基础上，采用减数淘选的策略，获得了针对rHuEPO糖链的噬菌体抗体。这些抗体对糖基的特异性用高碘酸钠和二硫苏糖醇/盐酸胍处理后的rHuEPO进行检验。在100个随机挑选的克隆中，有3个克隆表现出稳定表达糖基特异性抗体的能力，其中噬菌体克隆No.62可以识别rHuEPO的糖链，而噬菌体克隆No.63和No.83则可以识别由糖链和肽段共同构成的立体构象，这些结果初步展示了以免疫分析方法直接区分rHuEPO与EPO的可能性。
4.针对rHuEPO的多克隆抗体免疫亲和柱的制备和应用。以本组原先获得的抗rHuEPO的多抗为基础，用表面等离子体共振分析(SPR)和竞争ELISA方法测定了多抗的亲和常数、交叉反应性以及抗原决定簇；之后，将其与CNBr活化的Sepharose4B凝胶相偶联制成免疫亲和柱；该亲和柱的最大抗原rHuEPO结合量为2μg(6.6IU)，对低浓度rHuEPO样品(7.8，10，120mIU/mL)上样的回收率在78-86﹪之间，并且实际尿样的加标回收率为86﹪，为其进一步发展成为EPO兴奋剂检测的预处理方法以及改善现有EPO检测流程奠定了基础。