代谢综合征是一类集中心性肥胖，糖、脂代谢紊乱，高血压等多种代谢异常于一身的临床综合征。慢性炎症、血小板活化、血管内皮损伤也是代谢综合征的组成成分。目前普遍认为胰岛素抵抗是代谢综合征发病的中心环节。胰岛素抵抗可以导致血小板活化、血管内皮损伤、血栓形成，从而促进心血管疾病的发生。 CD40L（CD40 ligand）是一种分子量为39KD的II型跨膜蛋白，属于肿瘤坏死因子基因超家族成员。是新兴的研究慢性炎症、血小板活化的指标。 既往对于胰岛素抵抗与CD40L的研究大多是横断面调查，并没有进一步行干预实验来证实两者之间的关系。故设想在本次试验中不仅观测胰岛素抵抗动物模型中的CD40L的变化。并通过罗格列酮干预治疗，改善胰岛素抵抗后，观测CD40L变化，进一步说明胰岛素抵抗和CD40L的关系。有望使CD40L成为新的反映胰岛素抵抗状态下慢性炎症、血小板活化的观测指标。 本文将分三部分对上述问题进行阐述： 第一部分： 胰岛素抵抗大鼠模型的建立： 目的： 通过高脂、高热量饲料喂养诱导大鼠出现腹型肥胖、高甘油三酯血症、高胰岛素血症，从而成功建立胰岛素抵抗动物模型。 方法： 健康SD 6周龄大鼠60只，按体重随机分为普食组（C，n=15）、高脂组（HF，n=45）。C组喂以基础饲料，HF组喂以高脂饲料。0周时测定空腹血糖、空腹胰岛素、体重、HOMA-IR、血脂。高脂喂养8周后每4周检测一次。第12周复测空腹血糖、空腹胰岛素、体重、HOMA-IR、血脂。部分大鼠行OGTT、IRT、ITT评估胰岛素抵抗。处死部分大鼠（C组5只，HF组6只，共11只），称量腹内脂肪重量，计算体脂比。 结果： 一 各组生化指标比较 0周时两组体重、空腹血糖、空腹胰岛素、HOMA-IR、甘油三酯、胆固醇差异无统计学意义。至8周时高脂组体重高于普食组，差异有统计学意义（P<0.05）12周时除体重外，HOMA-IR、胆固醇、甘油三酯两组间也出现统计学差异（P<0.05）。部分大鼠体脂比，高脂组高于普食组（P<0.05）。血糖、胰岛素两组间差异未出现统计学意义（P>0.05）。 二 胰岛素抵抗评估： 口服糖耐量及胰岛素释放试验：高脂组AUC（OGTT）、AUC（IRT）均较普食组升高（P<0.05），且糖负荷后60、120分钟血糖，30、60分钟胰岛素也高于普食组（P<0.05）。 胰岛素耐量试验：注射胰岛素后高脂组大鼠血糖下降缓慢，40、90分钟血糖高于普食组（P<0.05）。曲线下面积增大（P<0.05）。 三 HOMA-IR相关性分析： spearman相关分析显示：HOMA-IR除与空腹血糖、胰岛素相关外尚与体重（r=0.31462，P<0.05）、甘油三酯相关（r=0.33643，P<0.05）。 结论： 使用高脂饲料经过12周喂养后诱导大鼠出现HOMA-IR升高、糖耐量下降、胰岛素敏感性下降。并伴有肥胖（尤其是中心性肥胖）及高甘油三酯血症。成功建立了胰岛素抵抗动物模型。 第二部分：CD40L在胰岛素抵抗大鼠中的表达 目的： 在胰岛素抵抗大鼠模型中观察CD40L的表达水平，并研究影响CD40L表达的相关因素。 方法： 健康SD 6周龄大鼠60只，按体重随机分为普食组（C）、高脂组（HF）。C组喂以基础饲料，HF组喂以高脂饲料。第12周胰岛素抵抗动物模型建立后。以ELISA法测定循环sCD40L浓度。处死部分大鼠（C组5只，HF组6只，共11只），腹主动脉采血，以免疫沉淀、免疫印迹测定血小板膜蛋白CD40L表达。取腹主动脉免疫组化检测CD40L在主动脉上的表达。 结果： 循环sCD40L水平在高脂组明显高于普食组（P=0.0001）。血小板膜蛋白CD40L经免疫沉淀、免疫印迹显示在39KD处见一蛋白条带。免疫组化显示CD40L主要表达于血管内皮细胞、平滑肌细胞上。高脂组CD40L阳性面积百分比高于普食组（P=0.0282）。相关分析显示：sCD40L 与体重相关（r=0.44355，P=0.0041）。 结论： 胰岛素抵抗大鼠CD40L明显升高，CD40L水平与肥胖相关。 第三部分：罗格列酮对胰岛素抵抗CD40L表达的影响 目的： 通过罗格列酮干预改善胰岛素抵抗，观察胰岛素抵抗转归过程中CD40L的变化，探讨胰岛素抵抗、CD40L之间的关系。 方法： 胰岛素抵抗大鼠模型建立后，高脂喂养大鼠随机分为：高脂对照组（HF，n=13）、小剂量罗格列酮治疗组（L，n=13）、大剂量罗格列酮治疗组（H，n=13）。普食组（C，n=10）。小剂量干预组每天给予罗格列酮5mg/kg，大剂量干预组每天给予罗格列酮10mg/kg灌胃。高脂对照组及普食组给予相应生理盐水灌胃。 干预治疗4周复测各大鼠体重、甘油三酯、胆固醇、血糖、胰岛素、HOMA-IR、胰岛素耐量、糖耐量、胰岛素释放，以及循环sCD40L、血小板膜蛋白CD40L表达水平。处死大鼠，分离腹主动脉，免疫组化测定主动脉上CD40L的表达。并测量体脂比。 结果： 一 各组生化指标比较： 罗格列酮干预4周后，大剂量治疗组血糖低于高脂组（P<0.05），胰岛素、HOMA-IR不仅低于高脂组也低于小剂量治疗组（P<0.05）。但小剂量组血糖、胰岛素、HOMA-IR与高脂组之间差异无统计学意义。两干预组体重、体脂比与高脂组相比差异无统计学意义。 二 胰岛素抵抗评估： 1. 口服糖耐量试验： 罗格列酮干预4周后大剂量干预组空腹、120分钟血糖均较高脂组低（P<0.05），小剂量组空腹血糖与高脂组差异无统计学意义，但120分钟血糖低于高脂组（P<0.05）。曲线下面积两治疗组均较高脂组降低（P<0.05）。 2. 胰岛素释放试验： 罗格列酮干预4周后大剂量干预组空腹胰岛素较高脂组低（P<0.05）。小剂量干预组各时点胰岛素与高脂组比较差异无统计学意义。曲线下面积大剂量干预组低于高脂组（P<0.05）。 3. 胰岛素耐量试验： 罗格列酮干预4周后在各组空腹血糖无统计学差异的情况下。大剂量干预组40、90、120分钟血糖低于高脂组（P<0.05）。小剂量治疗组仅90分钟血糖低于高脂组（P<0.05）。两干预组曲线下面积较高脂组减小（P<0.05）。 三 各组CD40L表达水平： 1. 循环sCD40L水平： 罗格列酮干预后大剂量治疗组sCD40L水平明显低于高脂组（P<0.05）。小剂量治疗组与高脂组相比无明显差异（P>0.05）。 2. 血小板膜蛋白CD40L表达水平： 高脂组CD40L表达高于普食组（2.08±0.40 vs 1.44±0.21，P<0.05)。大剂量干预组CD40L表达明显低于高脂组(1.41±0.27 vs 2.08±0.40，P<0.050)。小剂量干预组CD40L表达与高脂组差异无统计学意义（1.93±0.33 vs 2.08±0.40，P>0.05）。 3. CD40L在主动脉上的表达： CD40L主要表达于血管内皮细胞、平滑肌细胞。阳性面积百分比显示大剂量治疗组较高脂组明显下降（P<0.05），小剂量治疗组与高脂组无明显差异。 4. sCD40L相关性检验： 罗格列酮干预后spearman相关检验显示sCD40L不仅与体重、体脂比、甘油三酯相关，而且与AUC（ITT）、AUC（OGTT）相关。 结论： 本试验在罗格列酮治疗4周后，大剂量治疗组空腹胰岛素、HOMA-IR明显下降，同时改善了受损的糖耐量及胰岛素敏感性。在胰岛素抵抗得到改善的同时，大剂量治疗组sCD40L水平较高脂组明显降低，也低于干预前水平（P=0.0031）。说明sCD40L随着胰岛素抵抗的改善而下降。 在引入AUC（ITT）、AUC（OGTT）这两个代表胰岛素敏感性及糖耐量损伤程度的指标后，spearman 相关性检验显示sCD40L水平不仅与肥胖、高甘油三酯血症相关，也与胰岛素敏感性及糖耐量损伤相关。 小结： 1. 使用高脂饲料经过12周喂养后诱导大鼠出现HOMA-IR升高、糖耐量下降、胰岛素敏感性下降。并伴有肥胖（尤其是中心性肥胖）及高甘油三酯血症。成功制造出胰岛素抵抗动物模型。 2. 应用western blot、免疫组化成功检测到CD40L在血小板膜蛋白及主动脉中的表达。 3. 成功观测到胰岛素抵抗模型在胰岛素抵抗形成及其改善过程中CD40L的变化。较一般的横断面研究进一步说明两者之间的关系。使CD40L作为新型的反映应胰岛素抵抗慢性炎症及血小板活化状态的指标成为可能。