玉蕈与金针菇原生质体融合研究

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玉蕈(Hypsizigus marmoreus (Peck) Bigelw)又名斑玉蕈。因其具有螃蟹的味道,又叫做蟹味菇,是一种木质腐生真菌。玉蕈自然分布在欧洲、北美、日本和西伯利亚等地区。玉蕈含有氨基酸、维生素、矿物质元素、多糖等丰富的营养物质,品质优良,味道鲜美,口感极佳,是一种高蛋白、低脂肪、低热量的保健食品。金针菇(Flammulina velutiper(Fr.)Sing.)学名毛柄金钱菌。金针菇分布较广是一种木质腐生真菌。金针菇对儿童智力发育有良好的促进作用,因此也称为“增智菇”、“聪明菇”。它还具有抗肿瘤、免疫调节、降低胆固醇、保护肝细胞等功效,是一种富含维生素、矿物质元素、高蛋白、低脂肪、低热量的日常蔬菜和保健食品。作者的试验研究旨在获得兼具两亲本优良性状优势互补的融合株。为今后进入液体发酵、活性物质的提取、融合菌株的育种研究,进行人工栽培获得具有商品价值的子实体研究奠定基础。试验通过使用单因素法、正交设计法等筛选方式研究探讨了玉蕈和金针菇液体培养基的筛选、原生质体制备与再生、灭活标记、融合条件优化和融合株鉴定,得到如下结论:玉蕈最佳液体培养基:麦芽糖3.00%,蔗糖3.00%,酵母粉0.30%,麦麸1.00%,KH2PO40.10%, MgSO4·7H2O0.05%, VB10.0009%, pH自然。金针菇最佳液体培养基:马铃薯15.00%,玉米粉3.00%,KH2PO4 0.02%, MgSO4·7H2O 0.05%, K2HPO4 0.08%o玉蕈原生质体最佳制备条件:酶体系2.00%L,酶解温度27℃,酶解时间2.5h,渗稳剂KCl (0.50mol/L),菌龄4d。玉蕈原生质体最佳再生条件:酶体系2.00%L,酶解温度25℃,酶解时间3h,渗稳剂MgSO4·7H2O (0.50mol/L),菌龄5d。金针菇原生质体最佳制备条件:酶体系2.00%L,酶解温度27℃,酶解时间3h,渗稳剂KC1 (0.60mol/L),菌龄7d。金针菇原生质体最佳再生条件:酶体系1.00%L+1.00%C,酶解温度27℃,酶解时间2.5h,渗稳剂MgSO4·7H2O (0.60mol/L),菌龄7d。玉蕈最佳紫外灭活条件为:15 W紫外灯15 cm处,垂直照射50s。金针菇最佳热灭活条件为:50℃水浴中热处理20 min。双亲本原生质体融合的最佳条件,为:以30.00%的PEG6000与50 mmol/LCa2+混合溶液作为助融剂,调节pH为8.5,30℃融合30 min。试验通过颉颃试验、菌落与菌丝形态分析、菌丝生长速度比较、RAPD和ERIC分子生物学等方面对融合株进行了鉴定。试验结果表明融合株R1、R2与玉蕈亲缘关系较近,R3与金针菇亲缘关系较近。所得融合株均为双亲本融合所得,并继承了双亲本的性状。
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