论文部分内容阅读
牛奶作为一种最理想的天然食品,其营养丰富,老少皆宜,但近年来出现的抗生素牛奶让消费者闻之色变。虽然抗生素在预防和治疗奶牛疾病方面疗效显著,但由于不规范的使用,会导致其残留而引起机体严重的不良反应,甚至死亡。因此,实现对其的高灵敏、高通量、快速简便的检测极为必要。本研究通过结合表面增强拉曼光谱(SERS)技术的高灵敏性和金标检测试纸(LFA)的便捷性,以在牛奶中残留危害较为严重的新霉素、林可霉素、喹诺酮类抗生素为检测对象,建立新型的SERS-LFA方法,实现对单个或多个抗生素的超灵敏检测。(1)通过在金纳米粒子的表面分别修饰4-氨基苯硫酚(PATP)和新霉素单克隆抗体(NEO mAb),合成了拉曼免疫探针NEO m Ab-AuNPs-PATP,构建了SERS-LFA方法。在最优条件基础上,得出在0.0001-10.0 ng/mL浓度范围内线性良好,新霉素的IC50为0.04 ng/mL,检出限为0.216 pg/mL。并与其他相似化合物无交叉反应性,显示出较高的特异性。对牛奶样品的加标回收率在90%-106%范围内,相对标准偏差在3%-5%范围内(n=3)。并且对信号的重现性进行测定,在五个不同浓度下,每个浓度随机测定10个点的相对标准偏差分别为3.8%,4.4%,2.9%,3.2%和5.1%。此外,与其他的检测新霉素的方法相比,SERS-LFA的灵敏度最高。(2)建立基于γFe2O3@Au磁金纳米花(γFe2O3@Au NFs)的SERS-LFA,对新霉素进行测定。对实验参数进行优化,测得在0.0001-1.0 ng/mL浓度范围内线性良好,新霉素的IC50为0.013 ng/mL,检出限为0.17 pg/mL。对牛奶样品的加标回收率在84%-109%之间,相对标准偏差在4%-6%之间(n=3)。并对重现性、特异性进行了评价。(3)分别制备两种拉曼免疫探针NEO mAb-AuNPs-PATP和NOR mAb-AuNPs-PATP,并组装带有两条检测线的试纸,对新霉素和诺氟沙星进行同时检测。通过对实验参数进行优化,测得在0.0001-1.0 ng/m L浓度范围内线性良好,新霉素的IC50为0.03 ng/mL,检出限为0.37 pg/mL,诺氟沙星的IC50为0.07 ng/mL,检出限为0.55 pg/mL。并对特异性进行评价,新霉素与其他类似物无交叉,而诺氟沙星与12种其他喹诺酮类有不同程度的交叉,交叉反应率在1.5%-135.14%之间。对牛奶样品的加标回收率在86%-121%之间,相对标准偏差在3%-6%之间(n=3)。与其他的检测喹诺酮类的方法相比,SERS-LFA的灵敏度最高。(4)采用高碘酸钠法制备林可霉素免疫抗原(LIN-BSA)和包被抗原(LIN-OVA),并成功筛选到林可霉素单克隆抗体,用间接竞争ELISA测定其IC50为0.69 ng/mL。基于单克隆抗体,分别制备NEO m Ab-Au NPs-PATP和LIN mAb-AuNPs-DTNB两种拉曼免疫探针,并组装带有一条混合检测线的试纸,对新霉素和林可霉素实现一步法同时检测。对实验参数进行优化,在0.0001-1.0 ng/mL浓度范围内线性良好,测得新霉素的IC50为0.038 ng/mL,检出限为0.33 pg/mL,林可霉素的IC50为0.024 ng/mL,检出限为0.29 pg/mL。对牛奶样品的加标回收率在84%-113%之间,相对标准偏差在3%-8%之间(n=3),并对其可行性、特异性进行了评价。此外,也与其他的检测林可霉素的方法进行了比较。