玉竹多糖的分离纯化及结构表征

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玉竹,为百合科植物玉竹(Polygonatum odoratum(Mill.)Druce)的干燥根茎部分。玉竹是我国著名的药食两用资源,根据现代药理学研究显示,玉竹有强心、降血压,改善心肌缺血、缓解动脉粥样硬化斑块形成等的作用。目前相关研究主要还是集中在玉竹小分子化合物(如黄酮、皂苷和留醇等)提取纯化、结构特征及功能活性。在玉竹多糖的研究方面主要集中于传统提取工艺优化、基本理化性质的鉴定以及其生物活性中降低血糖、抗肿瘤、抗氧化及抗衰老等功效,而有关玉竹多糖的结构表征研究较少。本文以玉竹为研究对象,提取玉竹中多糖(Polysaccharides from Ploygonatum POA),并针对其分离纯化、理化性质、结构特征和体外抗氧化活性进行分析。本文主要研究内容如下:1.建立玉竹多糖提取分离的方法。通过水提醇沉法提取得到玉竹粗多糖(POA),多糖得率为56.40%。进一步利用70%乙醇分级沉淀,成功获得低分子量和高分子量玉竹多糖,依次记为POA-70S和POA-70P。对玉竹多糖的基本理化性质、官能团类型、表观形态进行了研究。结果发现,玉竹多糖主要以中性糖为主;红外光谱显示玉竹多糖POA-70S和POA-70P具有β型的特征吸收峰。两者的固体形貌有一定差异性。通过抗氧化实验发现,玉竹多糖对羟基自由基具有良好的清除效果,而对DPPH自由基的清除能力较弱。2.对玉竹多糖低分子量组分POA-70S进行结构分析。采用HPSEC、HPAEC、GC-MS和NMR等方法分析POA-70S的分子量分布、单糖组成、糖苷键类型及构型等结构信息。结果显示,POA-70S的均一性较好,相对重均分子质量为3.89×103 Da,流体力学半径Rh为1.4nm。SEM结果显示,POA-70S主要是光滑片状无定型固体形貌。POA-70S中主要含有果糖,以及少量的葡萄糖、岩藻糖和甘露糖,其质量分数之比为69.05:3.85:2.65:0.30;其甲基化分析表明POA-70S中含有 Fruf-(2→,D-Glcp-(1→,→6)-Fruf-(2→和→2)-Fruf-(1→糖苷键等残基,核磁共振结果证实POA-70S中果糖主要以β-构型存在,而Glcp-(1→以α-构型存在。3.采用上述同样的方法对玉竹多糖高分子量组分POA-70P进行结构分析。结果显示,POA-70P的均一性较好,重均相对分子质量为4.51×105 Da。POA-70P中主要由甘露糖组成,还有少量的阿拉伯糖、半乳糖、葡萄糖和半乳糖醛酸,其质量分数之比为36.67:1.63:8.73:5.36:0.99。SEM结果显示,POA-70P主要是细长的丝状缠绕成非均匀的网状结构和小球状结构。甲基化结果显示,POA-70P中存在 D-Manp-(1→,D-Galp-(1→,→4)-Manp-(1→,→4)-Galp-(1→,→4)-G1cp-(1→,→3,6)-Galp-(1→等残基。
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