硫酸改性聚醚醚酮对巨噬细胞粘附及其炎性细胞因子分泌的影响

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目的采用硫酸酸蚀处理方法对聚醚醚酮(PEEK)进行表面改性,形成新的表面结构,观察不同的表面结构及生物学性能。方法通过控制硫酸与材料反应条件,获得两种不同形貌的PEEK材料表面,其一是3D网状结构,其二为2D孔状结构。故分为三组,对照组(N)、3D网状结构组(3D)、2D孔状结构组(2D)。运用场发射扫描电子显微镜、光学轮廓仪、傅里叶红外光谱仪以及接触角测量仪对各组材料表面进行观察。在体外细胞实验研究中,运用扫描电镜观察各样品表面培养的J774A.1小鼠单核巨噬细胞。使用流式细胞仪鉴定小鼠骨髓来源的巨噬细胞(BMDMs),并进行流式PI染色检测各样品对其生存活性有无影响。在细胞分子实验研究中,探究了在炎症环境下各组材料表面对小鼠骨髓来源的巨噬细胞(BMDMs)炎症分泌的影响。采用实时荧光定量PCR(q RT-PCR)检测白细胞介素1β(IL-1β)和含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶(Caspase-1)基因表达;利用Western blot技术对白细胞介素1β(IL-1β)、白细胞介素1β前体(pro-IL-1β)、含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶(Caspase-1)、含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶前体(pro-Caspase-1)进行检测。此外运用ELISA技术鉴定各组材料表面培养细胞分泌上清中IL-1β含量。结果材料表面结果,抛光后的PEEK材料表面较为光滑,硫酸处理后3D组表面有三维立体的网状结构,2D组表面有二维单层孔隙状结构。原子力显微镜(AFM)结果显示光滑PEEK高度为-180.1nm到170.8nm,平整度较高。3D组高度在-390.5nm到302.2nm,2D组高度在-395.8nm到256.9nm。光学轮廓仪观察样品表面粗糙度:光滑PEEK的粗糙度是0.259μm。改性后3D组粗糙度为0.565μm,粗糙度有所增加;而2D组粗糙度为0.441μm,比3D组粗糙度小。此外,3D组和2D组表面结构覆盖率分别为89.7%和95.44%,表面结构均匀。傅立叶红外光谱观察发现3D组和2D组在1050cm-1吸收峰处可见S=O对称拉伸,N组未见,2D组吸收峰幅度更明显。在3393cm-1吸收峰处可见磺酸羟基-O-H,但N组未见,同样2D组吸收峰幅度大于3D组。材料亲疏水性测试中,3D组最为疏水,其次N组,2D组最为亲水。细胞学实验结果表明,黏附在2D组表面的J774A.1细胞的数量多于未处理组和3D组,并且2D组表面的细胞延伸出更多的伪足。此外BMDMs小鼠原代细胞流式鉴定纯度达到94.8%。流式PI生存活性检测发现空白对照组的BMDMs的PI染色率为1.98%,光滑PEEK组为2.79%,3D和2D组分别为2.75%和2.16%,这几组之间并无统计学差异。分子实验中,qRT-PCR结果显示IL-1β、Caspase-1基因表达2D组最低,3D组最高,差异有统计学意义(P<0.05)。Western blot结果显示上清中2D组成熟的IL-1β蛋白和Caspase-1蛋白表达低,3D组则较高;细胞内炎症蛋白表达差别不大。细胞上清中IL-1β细胞外泌体ELISA检测结果显示光滑PEEK和3D组的IL-1β分泌有所增加,但2D结构组分泌量又有明显降低,有统计学意义(P<0.05)。结论通过控制材料与硫酸的反应条件,在PEEK化学结构中引入磺酸基团,获得3D网状结构和2D孔隙结构。其中2D孔隙结构聚醚醚酮,有较高的细胞黏附和炎症调节潜能,是一种很有前途的口腔种植材料。
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