论文部分内容阅读
自20世纪80年代以来,我国水产养殖业迅猛发展,已从过去的粗放式养殖转变为集约化、高密度养殖。养殖户由于盲目地追求经济利益,养殖密度过大,水体持续恶化,导致疾病爆发。在对待疾病问题上,养殖户还是使用大量的抗生素类药物,不仅使病原菌产生耐药性,而且水产品的药物残留也会对人体产生危害。近年来,利用益生菌作为饲料添加剂和水质改良剂以实现健康养殖和高产增收,已初见成效。益生菌制剂也极有可能取代抗生素类药物,成为新型、绿色的水产动物保健品。随着对渔用益生菌作用机理研究的不断深入,各类具有益生效果的菌种也不断被发现,利用这些菌种进行发酵培养,摸索最适合的生产工艺也成为渔用益生菌研究的一个新方向。本研究首先在500 ml摇瓶条件下,选取从养殖水体中分离出的枯草芽孢杆菌B1884株和好氧反硝化细菌A762株为实验菌株,以农产品加工下角料和常见无机盐为实验原料,通过单因素试验筛选出最适宜两株菌生长的碳源、氮源和无机盐,并通过正交设计试验对碳氮源及无机盐的配比进行优化,以确定两株菌的发酵培养基。单因素实验结果表明:枯草芽孢杆菌1884株最优碳源为麸皮,最优氮源为花生粕,最优无机盐为KH2PO4,好氧反硝化细菌最优碳源为糖蜜,最优氮源为花生粕,最优无机盐为Na2HPO4。正交试验结果表明:枯草芽孢杆菌培养基成分的最优配比为(g/L):麸皮5,花生粕15,KH2PO410;好氧反硝化细菌培养基成分的最优配比为(g/L):糖蜜15,花生粕20,Na2HPO410。在培养基成分及配比确定后,在500 ml摇瓶条件下对温度、初始p H、初始接种量、装液量、摇床转速这些发酵条件进行摸索,最终确定最优的发酵条件如下:枯草芽孢杆菌B1884:培养温度38℃,初始p H为7.0,初始接种量3%,装液量150 ml,摇床转速220r/min;好氧反硝化细菌A762:培养温度28℃,初始p H为6.5,初始接种量5%,装液量150 ml,摇床转速300 r/min。经培养基与发酵条件优化后,枯草芽孢杆菌B1884在摇瓶培养条件下培养48 h,菌浓度达到1.11×1010 CFU/ml,芽孢数量达到9.33×109 CFU/ml,芽孢产率为84.05%。好氧反硝化细菌A762在摇瓶条件下培养96 h菌浓度达到1.28×1010CFU/ml。经摇瓶条件下优化发酵培养基和发酵条件后,采用5 L发酵罐进行小试以验证优化体系的可行性,枯草芽孢杆菌B1884株发酵24 h菌浓度达到7.95×1010 CFU/ml,芽孢数量达到7.12×1010 CFU/ml,芽孢产率为89.6%,好氧反硝化细菌A762发酵培养36 h菌浓度达到3.91×1010 CFU/ml。以上结果表明,发酵罐较摇瓶具有放大作用,具有一定的生产价值。