胃癌是一种常见的危害人类健康的疾病,其治疗方式主要依赖于手术切除,术后采用以化疗为主的辅助治疗。研究表明,胃癌血管新生在其发生、发展和转移过程中发挥重要作用。近年来,肿瘤血管新生抑制剂已成为恶性肿瘤治疗领域的热点,有些正在临床试验中。alphastatin具有很强的抑制血管内皮细胞管状结构形成和抗鼠源性CT26生长的作用,显示出良好的应用前景。为此,我们开展了alphastatin治疗胃癌及其作用机理的研究。目的是评价alphastatin抑制胃癌血管新生的可行性和有效性,为进一步研究治疗其他恶性肿瘤提供实验基础;进一步探讨alphastatin发挥血管新生的作用机制,为阐述其生物学活性提供理论依据。 利用标准细胞分离方法获得人血管内皮细胞(HUVECs)。我们分别观察了alphastatin对HUVECs迁移、增殖和管状结构形成等功能的影响。体外实验结果证实,alphastatin对HUVECs增殖无明显影响,也不会产生细胞毒性。alphastatin可明显抑制由HGF趋化引起HUVECs的迁移功能和Matrigel管状结构形成的作用,且呈现一定的量-效关系。随后,我们分别观察了alphastatin对裸鼠体内Matrigel Plug新生血管和裸鼠移植人胃癌肿瘤细胞生长状况的影响,并对肿瘤组织进行病理学检查。Matrigel Plug结果表明,alphastatin几乎能够完全抑制裸鼠体内新生血管的形成。通过裸鼠皮下注射人源性胃癌细胞(BGC823),我们建立了裸鼠移植瘤模型,对观察组裸鼠腹腔注射alphastatin,2周后分析裸鼠瘤体大小、重量、肿瘤血管密度等多项指标。裸鼠移植瘤实验结果证实,随着剂量的增大,alphastatin抑制肿瘤体积和重量的效应更加明显。组织病理学分析表明,观察组肿瘤组织内部血管数目较对照组中减少。 基于鞘脂类生长因子(尤其SPK,S1P)在血管新生方面扮演角色的理论基础。我们观察了alphastatin对肿瘤组织内分离的血管内皮细胞SPK活性的影响。将血管内皮细胞经alphastatin进行预处理,提取细胞总蛋白,测定细胞内SPK活性。结果证实,alphastatin能够降低血管内皮细胞内SPK活性,呈现量-