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背景、目的乳腺癌是妇女最常见的恶性肿瘤之一,最新数据显示,乳腺癌发病率仍然高居女性恶性肿瘤第一位,占所有女性新发恶性肿瘤的29%,复发率和死亡率高,乳腺癌的预防和治疗对女性的生活质量有至关重要的作用。研究表明,microRNA(miRNA)的突变、缺失及表达水平的异常与多种疾病的发生、发展密切相关。miR-155与乳腺癌发生正相关,然而miR-155如何与其靶标mRNA相互作用,进而发挥其在乳腺癌中调控作用的机制尚不十分清楚。因此,寻找miR-155在乳腺癌中靶基因,并以此为主线研究miR-155在某一特定生理或病理过程中的作用是阐述miR-155在乳腺癌中功能所必需的。方法基于课题组前期的实验,本研究挑选在乳腺癌组织和血清中均显著高表达的miR-155,进一步研究其在乳腺癌中的直接调控靶标。使用TargetScan和PicTar两个软件预测miR-155的靶基因,经过三步筛选:(1)两个软件预测的靶基因的交集;(2)根据不同参数,选取保守性和结合动力学等评分较高的的16个靶基因;(3)结合GO (The GeneOntology)、BioGPS(Gene Protal System)、KEGG (Kyoto Encyclopedia of Genes andGenomes)、HPRD (Human Protein Reference Database)和Target miRNA从靶基因的表达特点、位点及功能三方面筛选与乳腺癌相关性大的ACTA1(actin, alpha1,skeletal muscle)和CEBPB(CCAAT/enhancer binding protein, beta)。将ACTA1和CEBPB的3’UTR(3’untranslated region)全长序列载入到海肾荧光素酶基因的下游,并同时构建结合位点的突变序列,得到pRL-TK-Aw、pRL-TK-Am、pRL-TK-Cw、pRL-TK-Cm四种重组质粒,转染Bcap37乳腺癌细胞,并同时转染miR-155及内参对照萤火虫荧光素酶载体pGL3-control,根据不同转染的海肾荧光素酶表达活性,确定miR-155的靶基因。结果通过SPSS软件分析,结果显示miR-155显著下调CEBPB的3’UTR序列所在的海肾荧光素酶基因(P<0.05);而对ACTA1的3’UTR序列所在的海肾荧光素酶基因活性无明显调控作用(P>0.05)。结论由结果可知,miR-155在乳腺癌中的直接靶基因是CEBPB,miR-155通过下调CEBPB表达量而影响乳腺癌细胞的高增殖指数。