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目的:尖锐湿疣(condylomata acuminata,CA)是临床上常见的性传播疾病(sexually transmitted disease,STD),由人类乳头瘤病毒(human papilloma virus,HPV)感染所致。由于疣体生长速度快,易复发,给患者带来了巨大的身心痛苦。HPV是一类很小的嗜上皮性DNA病毒,其中与尖锐湿疣发病相关的主要有HPV6、11、16、18型,其发病与各型病毒编码的蛋白有关。p63与p53同属一个基因家族,兼具抑癌基因和原癌基因的作用,对于不同的刺激和调控表达不同功能。本实验通过对尖锐湿疣实验组和正常对照组中细胞调控因子p63蛋白表达情况的分析,探讨其在尖锐湿疣疾病发生、发展过程中的作用;通过荧光定量PCR对尖锐湿疣实验组中HPV荷载量的测定,分析的其与p63蛋白的关系,以及二者的临床意义。方法:采用HE染色观察组织形态特征。通过免疫组织化学PV二步法检测正常包皮对照组和尖锐湿疣实验组中p63蛋白的表达,对照组:20例,均为男性,年龄18~50岁,平均年龄29.15±10.19岁。实验组:34例,男性17例,女性17例,年龄18~52岁,平均年龄31.97±9.51岁。阳性表达判断:细胞核中出现明显棕黄色颗粒即为阳性细胞,在两名经验丰富的病理医生指导下,遵循客观,双盲原则,对样本进行免疫组化结果判定:观察5个(×400)高倍视野,计算每个视野中阳性细胞的平均百分比,阳性细胞0~5%为“-”,6%~25%为“+”,26%~50%为“++”,>50%为“+++”。通过荧光定量PCR法检测尖锐湿疣实验组中HPV荷载量,分别检测HPV6/11、16/18型病毒负荷量。结果判读:SLAN荧光定量PCR检测系统仪器Ct栏显示40表示检测样本低于检测限,报告为阴性;待测样本Ct值≤38,且扩增曲线呈典型S型,检测结果报告为阳性;待测样本Ct栏显示在38~40之间,需重复测定,如仍在38~40之间,且扩增曲线呈典型S型,则判断为阳性;若非典型S型曲线,则判断为阴性。所有数据通过统计软件SPSS13.0进行处理,采用秩和检验做差异性分析,两组变量间的相关性用Spearman等级相关处理,检验水准α=0.05,P<0.05认为差异有统计学意义。结果:1尖锐湿疣HE染色结果尖锐湿疣实验组标本切片经苏木素、伊红染色后低倍镜下可见表皮层呈乳头瘤样增生;基底层细胞增生明显,表皮棘层肥厚,棘层和颗粒层出现空泡化细胞;真皮浅层血管增生显著,血管周围可见有淋巴细胞浸润;角化过度伴角化不全同时发生,其中最显著的是典型的空泡化细胞和乳头瘤样增生,为尖锐湿疣的经典病理表现。2正常对照组织、尖锐湿疣组织中p63蛋白表达p63蛋白在免疫组织化学染色阳性表达时主要表达于细胞核,呈棕黄色颗粒,少数细胞胞浆可呈弱阳性表达。34例尖锐湿疣组织中p63阳性表达34例,其中“+”为5例,“++”为12例,“+++”为17例,阳性表达率为100.0%(34/34);20例正常对照组织中19例为阳性表达,其中“+”为9例,“++”为7例,“+++”为3例,阳性表达率为95.0%(19/20)。可见正常组织和尖锐湿疣组织中p63均有表达。若以“+”、“++”为低表达,“+++”为过度表达[6]计算,尖锐湿疣组低表达阳性率为50.0%(17/34),而对照组为80.0%(16/20);过度表达在尖锐湿疣组中占50.0%(17/34),对照组为15.0%(3/20)。对比两组数据发现P63在尖锐湿疣组织中的表达水平与正常组织间有显著差异(P<0.01)(见Table1)。尖锐湿疣组织中的阳性免疫染色主要在基底层、棘层、颗粒层,染色较深,呈弥漫性高表达(见Fig.4-5);正常对照组织中染色较浅,主要表达于基底层,棘层和颗粒层表达较少或缺如,(见Fig.6)。对比全部标本染色发现尖锐湿疣实验组标本中的染色强度明显高于对照组。3尖锐湿疣组织中p63蛋白的表达在各临床病理参数之间有无差异性用统计学分别处理临床病理各参数发现,尖锐湿疣组织中,p63蛋白的表达在性别、发病部位及年龄因素方面均无差异。年龄<35岁与年龄≥35岁两组间差异无统计学意义(P>0.05);男性和女性两组间P>0.05,无统计学差异;p63蛋白在肛周和生殖器两组别中的差别无统计学意义(P>0.05)(见Table 2)。4尖锐湿疣组织中p63蛋白表达与HPV6/11荷载量的关系整理SLAN荧光定量PCR检测仪得出的数据结果显示:尖锐湿疣实验组34例中,单纯HPV6/11亚型阳性者32例,单纯HPV16/18亚型阳性者0例,两者复合阳性者为2例。本实验数据显示,尖锐湿疣组织中HPV6/11亚型感染占绝大多数,对比尖锐湿疣实验组中HPV6/11荷载量与p63蛋白表达,经数据处理,SPSS13.0软件分析显示两者呈显著正相关,相关系数r=0.398,P=0.020,差异有统计学意义(P<0.05)(见Table 3)。结论:1尖锐湿疣实验组中p63表达强度和范围明显高于正常对照组,其可能参与了尖锐湿疣皮肤代谢紊乱的调控,推测p63在尖锐湿疣癌变过程中起一定作用。2在尖锐湿疣组织中p63蛋白的表达程度和HPV6/11荷载量呈显著正相关,提示HPV6/11荷载量和p63过表达在尖锐湿疣发病、复发过程中有协同作用。3对尖锐湿疣患者进行HPV6/11荷载量检测,可以明确感染的HPV亚型和病毒荷载量,据此指导对患者的随访观察,降低复发。