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目的：富自体浓缩生长因子（Concentrated Growth Factors，CGF）纤维蛋白凝胶（液体）是通过差速不间断离心技术获取的血液提取物，含有多种生长因子及纤维蛋白，具有促进细胞增殖、分化、趋化和刺激血管化的功能，能够加速软硬组织修复，是再生医疗领域中的新技术。富自体CGF纤维蛋白凝胶可应用于修复骨缺损、牙周组织缺损、软组织创伤和上颌窦底提升术等方面。本实验采用酶联免疫吸附法检测三种不同处理离心管制取的富自体CGF纤维蛋白凝胶（液体）中活性因子及其含量，探讨三种离心管制备的富自体CGF纤维蛋白凝胶（液体）中活性因子及含量的不同，为临床应用富自体CGF纤维蛋白凝胶（液体）提供理论依据。方法：1研究对象入选标准选择五位健康志愿者（男3例，女2例）。入选标准：1.1年龄在18~23岁之间；1.2无肝炎史，无免疫疾病史；1.3采血前一个月无感染史，无服用抗菌药史；1.4采血前3个月未服用阿司匹林等影响血细胞的药物；1.5女性志愿者未在月经期；1.6志愿者知情并同意采血用于本实验。2实验步骤2.1实验分组根据不同处理的Medifuge离心制造机特殊匹配试管（9ml，真空负压）制备的富自体CGF纤维蛋白凝胶（液体）性状不同分为三组：A组：管帽为红色标记的离心管，内壁粗糙，未添加抗凝剂等化学试剂，制备富自体CGF纤维蛋白凝胶；B组：管帽为白色标记的离心管，内壁光滑，未添加抗凝剂等化学试剂，制备的富自体CGF纤维蛋白液室温静置20min后变成松散的凝胶；C组：管帽为绿色标记的离心管，添加肝素钠抗凝剂，制备富自体CGF纤维蛋白液。2.2CGF制备分别采用A、B、C三组离心管，采取每位志愿者前臂静脉血27ml，每只离心管9ml，注满后勿摇动。立即放入Medifuge离心制造机，按预定程序制备CGF。各获得：A组：富自体CGF纤维蛋白凝胶五份；B组：富自体CGF纤维蛋白液五份；C组：富自体CGF纤维蛋白液五份。3检测前样本制备3.1富自体CGF纤维蛋白凝胶（液体）的液态处理A组：将富自体CGF纤维蛋白凝胶（去除底端红色凝胶部分），移入玻璃匀浆器，冰浴条件下，缓慢研磨成匀浆，匀浆液在4℃条件下，以3000r/min的速度离心5min，留取上清液待测；B组：将富自体CGF纤维蛋白液室温静置20min后变成的松散凝胶移入玻璃匀浆器，冰浴条件下，缓慢研磨成匀浆，匀浆液在4℃条件下，以3000r/min的速度离心5min，留取上清液待测；C组：吸出富自体CGF纤维蛋白液直接移入5ml离心管内待测。3.2样本稀释检测前对检测样本以0.01mol/L的PBS缓冲液做如下稀释：检测IGF-1及BMP-2时，将三组样本各稀释50倍；检测VEGF-A及EGF时，将三组样本各稀释10倍；检测PDGF-BB、bFGF、TNF-α、IL-Iβ及OPG时，不稀释样本。3.3样本活化检测TGF-β1含量时，三组样本需在检测前2小时内做活化处理4活性因子成分及含量检测4.1双抗体夹心酶联免疫吸附试验（ELISA）对三组样本中TGF-β1、PDGF-BB、 EGF、 VEGF-A、IGF-1、BMP2、OPG、TNF-α和IL-Iβ进行定性及定量检测。4.2竞争免疫抑制ELISA法对三组样本中bFGF进行定性及定量检测。具体操作步骤严格按照使用说明书进行。5统计学分析采用SPSS19.0统计软件进行统计学分析。首先对实验数据的不同组进行正态性和方差齐性检验。如果服从正态性和方差齐性，则采用单因素方差分析（One-Way Analysis of Variance，简称One-Way ANOVA)进行各组均数差异的比较。如果存在显著性差异则需进行两两比较，加用SNK-q检验进行多重比较，分析比较各组的差异所在。如果不服从正态性和方差齐性，则采用秩和检验。检验水准定为0.05，即P<0.05，差异具有统计学意义。结果：1富自体CGF纤维蛋白凝胶（液体）肉眼观察：A组制备的富自体CGF纤维蛋白凝胶为淡黄色的凝胶，柔软，韧性好；B组制备的富自体CGF纤维蛋白液为淡黄色澄清液体，室温静置约20min后变成松散的凝胶，柔软，韧性差；C组制备的富自体CGF纤维蛋白液为淡黄色澄清液体，室温静置不会发生变化；2活性因子检测结果：三组富自体CGF纤维蛋白凝胶（液体）中活性因子检测结果相同，都含有：转移生长因子-β1（Transforming Growth Factor-β1，TGF-β1）、胰岛素样生长因子-1（Insulin-like Growth Factors-1，IGF-1）、血管内皮生长因子-A(Vascular Endothelial Growth Factor-A，VEGF-A)、血小板衍生生长因子-BB（Platelet-derived Growth Factor-BB，PDGF-BB)、碱性成纤维细胞生长因子(Basic Fibroblast Growth Factor， bFGF)、骨形成蛋白-2（Bone Morphogenetic Proteins-2，BMP-2）、表皮生长因子(EpidermalGrowth Factor，EGF)和骨保护素(Osteoprotegerin,，OPG)等活性因子；三组富自体CGF纤维蛋白凝胶（液体）均未检出肿瘤坏死因子-α（TumorNecrosis Factor-α，TNF-α）和白细胞介素-Iβ（Interleukin-1β，IL-Iβ）。3活性因子含量检测结果：TGF-β1含量：A组：5749.96±2039.28pg/ml，B组：994.22±107.84pg/ml，C组：1878.61±789.97pg/ml；三组之间有显著性差异（P<0.05）；各组TGF-β1含量从高到低依次为：A组、C组、B组。PDGF-BB含量：A组：1696.85±183.8pg/ml，B组：1680.34±143.11pg/ml，C组：1268.49±279.45pg/ml；三组之间有显著性差异（P<0.05）；各组PDGF-BB含量从高到低依次为：A组、B组、C组。VEGF-A含量：A组：1276.47±153.10pg/ml，B组：1404.49±353.59pg/ml，C组：2015.3±586.16pg/ml；三组之间有显著性差异（P<0.05）；各组VEGF-A含量从高到低依次为：C组、B组、A组。IGF-1含量：A组：35.45±9.56ng/ml，B组：44.8±12.81ng/ml，C组：51.39±31.18ng/ml；三组之间没有显著性差异（P>0.05）；各组IGF-1含量数值从高到低依次为：C组、B组、A组。bFGF含量：A组：8.47±1.8ng/ml，B组：8.39±1.0ng/ml，C组：11.62±4.56ng/ml；三组之间没有显著性差异（P>0.05）；各组bFGF含量数值从高到低依次为：C组、A组、B组。BMP-2含量：A组：966.7±125.82pg/ml，B组：1051.5±343.68pg/ml，C组：1155±412.72pg/ml；三组之间没有显著性差异（P>0.05）；各组BMP-2含量数值从高到低依次为：C组、B组、A组。OPG含量：A组：2494.76±1822.45pg/ml，B组：2749.95±1908.45pg/ml，C组：2741.15±2183.73pg/ml；三组之间没有显著性差异（P>0.05）；各组OPG含量数值从高到低依次为：B组、C组、A组。EGF含量：A组：813.44±597.8pg/ml，B组：322.31±31.47pg/ml，C组：345.5±32.32pg/ml；三组之间没有显著性差异（P>0.05）；各组EGF含量数值从高到低依次为：A组、C组、B组。结论：1三种不同处理的离心管制备的富自体CGF纤维蛋白凝胶（液体）活性因子相同；2三种不同处理的离心管制备的富自体CGF纤维蛋白凝胶（液体）间bFGF、EGF、BMP-2、OPG、IGF-1五种活性因子的含量没有显著性差异，TGF-β1、VEGF-A、PDGF-BB三种活性因子的含量有显著性差异；3三种不同处理的离心管制备的富自体CGF纤维蛋白凝胶（液体）性状不同，所含活性因子成分相同，个别活性因子的含量有显著差异，生物学效能近似，可以适用于临床不同需求，拓宽临床应用范围。