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目的：铜绿假单胞菌是引起医院内感染常见的条件致病菌之一,其对抗菌药物的耐药机制非常复杂,获得并表达金属β-内酰胺酶(metallo-β-lactamase,MBL)是铜绿假单胞菌对碳青霉烯类抗生素耐药的主要机制之一。具有捕获及表达外来基因能力的整合子-基因盒系统在金属酶基因的快速播散中意义重大,其介导的多种耐药基因也是造成铜绿假单胞菌多重耐药的重要原因之一。本课题选取天津地区四所三级甲等医院临床分离的耐亚胺培南铜绿假单胞菌(imipenem-resistant Pseudomonas aeruginosa, IRPA)为研究对象,分析其对常见抗菌药物的耐药性,研究金属β-内酰胺酶和Ⅰ类整合子的流行情况,并对铜绿假单胞菌所携带的IMP-1基因进行定位,确定其是否位于整合子上;最后从IMP-1型金属酶基因mRNA表达的角度,对铜绿假单胞菌产金属酶情况和细菌对亚胺培南耐药性之间的关系进行分析。方法：选取2007年1月-12月天津市四所三级甲等医院分离出的67株耐亚胺培南铜绿假单胞菌为受试菌,采用K-B法对所有菌株进行药敏试验,并比较其对不同抗菌药物的耐药性；用EDTA纸片协同抑制试验对亚胺培南耐药株进行金属酶表型筛选,并用PCR方法扩增IMP和VIM型金属酶基因：采用PCR方法扩增I类整合酶基因,对整合酶阳性株进行可变区的PCR扩增并将PCR产物进行测序,将测序结果在Genbank上行同源性分析,确定可变区携带的基因盒；采用PCR方法对IMP-1基因进行定位；最后利用实时荧光定量RT-PCR的方法,检测IMP-1mRNA的表达量,分析其表达量与细菌对亚胺培南MIC之间的关系。结果：1.67株临床分离的耐亚胺培南铜绿假单胞菌均为多重耐药菌株,药敏结果示：受试菌耐药情况严重,对亚胺培南、美罗培南的耐药率接近100%：对庆大霉素、氯霉素和环丙沙星的耐药率超过了70%,对阿米卡星的耐药率接近60%,对头孢他啶、头孢哌酮/舒巴坦的耐药率在40%左右,对氨曲南的耐药率最低,为31.34%。2.PCR结果显示,在67株耐亚胺培南铜绿假单胞菌中,有19株携带IMP-1型金属酶基因,检出率接近28%,其中有16株金属酶表型筛选实验阳性；在这19株IMP-1基因阳性株中,有15株携带的IMP-1基因位于Ⅰ类整合子上,与aadB氨基糖苷耐药基因共同位于整合子可变区中。3.在67株耐亚胺培南铜绿假单胞菌中,检出46株铜绿假单胞菌携带I类整合酶基因,阳性率68.65%,其中有2株检出可变区结构,1株(PA60)可变区为aadB和cm1A基因,其序列与Genbank中目标基因(DQ266448)中两基因序列100%一致；另1株(PA27)可变区为aac(6’)-Ⅱ-cm1A8-OXA-10,确定为一种新型耐药基因盒组合形式,GenBank登录号为EU708817。4.实时荧光定量RT-PCR和统计结果显示：Group1(低MIC组)和Group2(高MIC组)两组样本IMP-1基因mRNA相对表达量的差别有统计学意义(P=0.026), Group1(低MIC组)的(?)mRNA相对表达量显著低于Group2(高MIC组),亚胺培南耐药与IMP-1表达存在一定的相关性。结论：67株耐亚胺培南铜绿假单胞菌可选择抗生素有限,对氨曲南和头孢他啶的耐药性较低,分别为31.34和40.30%；19株携带IMP-1型金属β-内酰胺酶(28%),与国内外其他地区报道相近,其中大多数菌株携带的IMP-1基因位于I类整合子上,表明整合子在金属酶基因的快速播散中意义重大；同时I类整合酶基因广泛分布在耐亚胺培南铜绿假单胞菌中,此外本研究还检出1株携带新型基因盒组合形式I类整合子的铜绿假单胞菌,表明了整合子-基因盒系统的高度异质性；通过对IMP-1基因mRNA目对表达量的检测,发现细菌对亚胺培南的MIC与该基因mRNA的表达升高有关。